| 摘要 | 第1-4页 |
| Abstract | 第4-11页 |
| 1 引言 | 第11-17页 |
| ·IGSF（IMMUNOGLOBULIN SUPERFAMILY，IGSF）蛋白家族 | 第12-14页 |
| ·IZUMO 蛋白 | 第14-17页 |
| ·Izumo 的发展历程 | 第14页 |
| ·绒山羊 Izumo 基因的研究背景 | 第14-15页 |
| ·Izumo 基因在精子中的定位 | 第15页 |
| ·Izumo 基因在精卵融合中的作用机制 | 第15页 |
| ·Izumo 是免疫避孕疫苗的候选靶分子 | 第15-17页 |
| 2 实验一 绒山羊精子特异性膜蛋白 IZUMO 的克隆及其序列分析 | 第17-29页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·主要仪器 | 第17页 |
| ·主要试剂 | 第17-18页 |
| ·载体 | 第18页 |
| ·菌株 | 第18页 |
| ·实验动物及其组织 | 第18页 |
| ·常用试剂的配方 | 第18-20页 |
| ·LB 液体培养基 | 第18-19页 |
| ·LB 选择性液体培养基 | 第19页 |
| ·LB 选择性固体培养基 | 第19页 |
| ·TBE 电泳缓冲液 | 第19-20页 |
| ·实验方法 | 第20-25页 |
| ·绒山羊睾丸组织总 RNA 的提取 | 第20页 |
| ·RT 法合成cDNA 第一条链 | 第20-21页 |
| ·目的片段 PCR 扩增 | 第21-22页 |
| ·PCR 引物设计 | 第21页 |
| ·PCR 引物稀释 | 第21页 |
| ·PCR 反应体系 | 第21-22页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第22-23页 |
| ·重组克隆载体的构建 | 第23-25页 |
| ·PCR 产物和pMD 19-T Vector 载体的连接 | 第23-24页 |
| ·转化感受态细胞 E.coli Competent Cells JM109 | 第24页 |
| ·质粒的小量提取 | 第24-25页 |
| ·转化克隆的筛选和鉴定 | 第25页 |
| ·PCR 法初步筛选阳性克隆 | 第25页 |
| ·重组质粒 PMD-19-PCR 产物的酶切鉴定 | 第25页 |
| ·结果 | 第25-29页 |
| ·睾丸组织总 RNA 的检测 | 第25-26页 |
| ·PCR 扩增结果 | 第26-27页 |
| ·重组克隆载体的鉴定 | 第27-29页 |
| ·PCR 鉴定 | 第27页 |
| ·酶切鉴定 | 第27-28页 |
| ·重组质粒测序及序列分析 | 第28-29页 |
| ·讨论 | 第29页 |
| 3 实验二 绒山羊 IZUMO 基因全长序列的扩增与分析 | 第29-55页 |
| ·材料 | 第29-31页 |
| ·实验动物及其组织 | 第29-30页 |
| ·主要试剂 | 第30页 |
| ·实验仪器 | 第30页 |
| ·常用试剂配方（配制见附录1） | 第30页 |
| ·载体 | 第30页 |
| ·菌株 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-41页 |
| ·PCR 引物的设计与合成 | 第31页 |
| ·绒山羊睾丸组织总 RNA 的提取 | 第31页 |
| ·3′端未知序列的扩增 | 第31-35页 |
| ·合成cDNA 第一条链 | 第31-32页 |
| ·套式 PCR 反应 | 第32-35页 |
| ·PCR 引物稀释 | 第32页 |
| ·Outer PCR 反应 | 第32-33页 |
| ·Inner PCR 反应 | 第33页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第33-34页 |
| ·PCR 产物和pMD 20-T Vector 载体的连接 | 第34页 |
| ·转化感受态细胞 E.coli Competent Cells JM109 | 第34-35页 |
| ·质粒的小量提取 | 第35页 |
| ·5′端未知序列的扩增 | 第35-41页 |
| ·合成cDNA 第一条链 | 第35-38页 |
| ·去磷酸化处理 | 第36-37页 |
| ·“去帽子”反应 | 第37页 |
| ·5′RACE Adaptor 的连接 | 第37页 |
| ·反转录反应 | 第37-38页 |
| ·套式 PCR 反应 | 第38-41页 |
| ·PCR 引物稀释 | 第38页 |
| ·Outer PCR 反应 | 第38-39页 |
| ·Inner PCR 反应 | 第39页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第39-40页 |
| ·PCR 产物和pMD 20-T Vector 载体的连接 | 第40页 |
| ·转化感受态细胞 E.coli Competent Cells JM109 | 第40-41页 |
| ·质粒的小量提取 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-54页 |
| ·睾丸组织总 RNA 的检测 | 第41-42页 |
| ·3′端未知序列的扩增 | 第42-43页 |
| ·5′端未知序列的扩增 | 第43-44页 |
| ·Izumo CDS 区序列的扩增 | 第44-46页 |
| ·绒山羊 Izumo CDS 区氨基酸序列及与其他物种的同源性比较 | 第46-47页 |
| ·绒山羊 Izumo CDS 区氨基酸序列分析 | 第47-48页 |
| ·绒山羊 Izumo CDS 区二级结构分析 | 第48-51页 |
| ·绒山羊 Izumo CDS 区的磷酸化分析 | 第51-52页 |
| ·绒山羊 Izumo CDS 区的蛋白质组分分析 | 第52页 |
| ·绒山羊 Izumo CDS 区的抗原肽段分析 | 第52-54页 |
| ·讨论 | 第54-55页 |
| 4 实验三 绒山羊 IZUMO MRNA 的组织表达 | 第55-65页 |
| ·材料 | 第55-56页 |
| ·实验动物及其组织 | 第55页 |
| ·主要试剂及器材 | 第55页 |
| ·实验仪器 | 第55-56页 |
| ·实验方法 | 第56-61页 |
| ·绒山羊 Izumo mRNA 的 RT-PCR 组织表达鉴定 | 第56-57页 |
| ·绒山羊睾丸和附睾的头部、体部、尾部组织总 RNA 的提取 | 第56页 |
| ·RT 法合成cDNA 第一条链 | 第56页 |
| ·目的片段 PCR 扩增 | 第56-57页 |
| ·PCR 引物设计 | 第56页 |
| ·PCR 反应体系 | 第56-57页 |
| ·PCR 产物的胶回收 | 第57页 |
| ·绒山羊 Izumo mRNA 的 Northern 印记 | 第57-61页 |
| ·探针 PCR 引物的设计与合成 | 第57页 |
| ·标记探针的制备 | 第57-58页 |
| ·检测扩增产物的地高辛掺入效率 | 第58页 |
| ·变性胶的制备 | 第58页 |
| ·Northern 杂交的样品的制备 | 第58页 |
| ·电泳 | 第58-59页 |
| ·将 RNA 从变性胶转移到尼龙膜 | 第59-60页 |
| ·预杂交 | 第60页 |
| ·杂交 | 第60页 |
| ·洗膜 | 第60-61页 |
| ·杂交信号检测 | 第61页 |
| ·结果 | 第61-63页 |
| ·睾丸组织和附睾的头、体、尾部组织总 RNA 的检测 | 第61-62页 |
| ·睾丸和附睾的头、体、尾部组织 Izumo mRNA 的 RT-PCR 表达鉴定 | 第62页 |
| ·探针标记效率检测 | 第62-63页 |
| ·杂交信号检测结果 | 第63页 |
| ·讨论 | 第63-65页 |
| 致谢 | 第65-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 附录 | 第70-72页 |
| 作者简介 | 第72页 |
