| 摘要 | 第5-9页 |
| Abstract | 第9-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第21-39页 |
| 1 角膜的解剖学特征与生理功能 | 第21-24页 |
| 1.1 角膜的解剖学特征 | 第21-23页 |
| 1.1.1 上皮层 | 第21-22页 |
| 1.1.2 前弹力层 | 第22页 |
| 1.1.3 基质层 | 第22-23页 |
| 1.1.4 后弹力层 | 第23页 |
| 1.1.5 内皮层 | 第23页 |
| 1.1.6 角膜缘 | 第23页 |
| 1.2 角膜的生理功能 | 第23-24页 |
| 1.2.1 屏障功能 | 第23-24页 |
| 1.2.2 透光功能 | 第24页 |
| 1.2.3 屈光功能 | 第24页 |
| 2 角膜病变及治疗 | 第24-25页 |
| 3 组织工程角膜研究进展 | 第25-38页 |
| 3.1 组织工程角膜种子细胞的研究 | 第25-30页 |
| 3.1.1 角膜缘干细胞(limbal stem cells) | 第26-27页 |
| 3.1.2 间充质干细胞(mesenchymal stem cells) | 第27页 |
| 3.1.3 角膜上皮细胞(corneal epithelial cells) | 第27-28页 |
| 3.1.4 口腔黏膜上皮细胞(oral mucosa epithelial cell) | 第28-29页 |
| 3.1.5 角膜基质细胞(corneal stromal cells) | 第29页 |
| 3.1.6 角膜内皮细胞(corneal endothelial cells) | 第29-30页 |
| 3.2 组织工程角膜载体支架材料的研究 | 第30-37页 |
| 3.2.1 天然生物材料 | 第30-31页 |
| 3.2.2 人工合成高分子材料 | 第31-32页 |
| 3.2.3 生物大分子复合材料 | 第32-37页 |
| 3.3 组织工程全层角膜体外构建研究进展 | 第37-38页 |
| 4 本文的研究目的和意义 | 第38-39页 |
| 第二章 鱼类胶原蛋白支架的制备及其鉴定 | 第39-54页 |
| 1 材料与用品 | 第39-43页 |
| 1.1 实验材料 | 第39-40页 |
| 1.2 实验仪器 | 第40页 |
| 1.3 实验耗材 | 第40-41页 |
| 1.4 实验试剂 | 第41页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第41-43页 |
| 2 实验方法 | 第43-46页 |
| 2.1 鱼胶原蛋白鉴定 | 第43页 |
| 2.1.1 鱼胶原蛋白分子量检测 | 第43页 |
| 2.1.2 鱼胶原蛋白氨基酸组成分析 | 第43页 |
| 2.2 交联条件优化 | 第43-45页 |
| 2.2.1 交联浓度优化 | 第43-44页 |
| 2.2.2 交联时间优化 | 第44页 |
| 2.2.3 冰冻切片 | 第44页 |
| 2.2.4 HE染色 | 第44-45页 |
| 2.3 鱼类胶原蛋白支架的制备 | 第45页 |
| 2.4 鱼类胶原蛋白支架理化性质检测 | 第45-46页 |
| 2.4.1 外观观察 | 第45页 |
| 2.4.2 透光率 | 第45页 |
| 2.4.3 含水量检测 | 第45页 |
| 2.4.4 力学性能检测 | 第45页 |
| 2.4.5 鱼类胶原蛋白支架组织结构检测 | 第45-46页 |
| 3 结果 | 第46-51页 |
| 3.1 鱼胶原蛋白鉴定 | 第46-47页 |
| 3.1.1 分子量检测 | 第46-47页 |
| 3.1.2 氨基酸分析 | 第47页 |
| 3.2 EDC/NHS交联条件优化 | 第47-49页 |
| 3.2.1 交联浓度优化 | 第48页 |
| 3.2.2 交联时间优化 | 第48-49页 |
| 3.3 鱼类胶原蛋白支架的鉴定 | 第49-51页 |
| 3.3.1 透光性能检测 | 第49页 |
| 3.3.2 含水量检测 | 第49-50页 |
| 3.3.3 力学性能检测 | 第50页 |
| 3.3.4 鱼类胶原蛋白支架的组织结构 | 第50-51页 |
| 4 讨论 | 第51-53页 |
| 5 本章小结 | 第53-54页 |
| 第三章 人角膜组织细胞的体外扩增培养及其鉴定 | 第54-71页 |
| 1 材料与用品 | 第54-57页 |
| 1.1 实验材料 | 第54页 |
| 1.2 实验仪器 | 第54-55页 |
| 1.3 实验耗材 | 第55页 |
| 1.4 实验试剂 | 第55-56页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第56-57页 |
| 2 实验方法 | 第57-61页 |
| 2.1 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的复苏及扩增培养 | 第57-58页 |
| 2.1.1 细胞的复苏 | 第57-58页 |
| 2.1.2 细胞的扩增培养 | 第58页 |
| 2.2 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的细胞生长曲线测定 | 第58-59页 |
| 2.3 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的染色体组型分析 | 第59-60页 |
| 2.4 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的免疫细胞化学检测 | 第60-61页 |
| 3 结果 | 第61-67页 |
| 3.1 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的生长特性 | 第61-63页 |
| 3.2 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的染色体组型分析 | 第63-65页 |
| 3.2.1 HCEP细胞的染色体组型 | 第63-64页 |
| 3.2.2 HCS细胞的染色体计数与核型分析 | 第64页 |
| 3.2.3 HCE细胞的染色体计数与核型分析 | 第64-65页 |
| 3.3 HCEP细胞、HCS细胞及HCE细胞的免疫细胞化学检测 | 第65-67页 |
| 4 讨论 | 第67-69页 |
| 5 本章小结 | 第69-71页 |
| 第四章 鱼类胶原蛋白支架的生物相容性研究 | 第71-88页 |
| 1 材料与用品 | 第71-74页 |
| 1.1 实验材料 | 第71页 |
| 1.2 实验仪器 | 第71-72页 |
| 1.3 实验耗材 | 第72页 |
| 1.4 实验试剂 | 第72-73页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第73-74页 |
| 2 实验方法 | 第74-80页 |
| 2.1 鱼类胶原蛋白支架的制备和灭菌处理 | 第74-75页 |
| 2.1.1 鱼类胶原蛋白支架的制备 | 第74-75页 |
| 2.1.2 鱼类胶原蛋白支架的灭菌处理 | 第75页 |
| 2.2 鱼类胶原蛋白支架浸提液制备 | 第75页 |
| 2.3 人角膜细胞的体外培养与接种 | 第75-76页 |
| 2.3.1 人角膜细胞体外培养 | 第75页 |
| 2.3.2 接种前鱼类胶原蛋白支架的处理 | 第75页 |
| 2.3.3 HCEP细胞的CFSE标记与接种 | 第75页 |
| 2.3.4 HCS细胞的DiI标记与接种 | 第75-76页 |
| 2.3.5 HCE细胞的Celltrace标记与接种 | 第76页 |
| 2.4 生物相容性检测 | 第76-80页 |
| 2.4.1 细胞活力检测 | 第76页 |
| 2.4.2 RT-PCR检测 | 第76-79页 |
| 2.4.3 荧光标记物观察 | 第79页 |
| 2.4.4 免疫组织化学检测 | 第79-80页 |
| 2.5 数据统计 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-85页 |
| 3.1 鱼类胶原蛋白支架浸提液对种子细胞的细胞活力影响 | 第80-81页 |
| 3.2 鱼类胶原蛋白支架中种子细胞的生长及增殖基因的表达情况 | 第81-82页 |
| 3.3 鱼类胶原蛋白支架中种子细胞标志蛋白与功能蛋白表达情况 | 第82-85页 |
| 3.3.1 鱼类胶原蛋白支架中HCEP细胞标志蛋白与功能蛋白表达情况 | 第82-83页 |
| 3.3.2 鱼类胶原蛋白支架中HCS细胞标志蛋白与功能蛋白表达情况 | 第83-84页 |
| 3.3.3 鱼类胶原蛋白支架中HCE细胞标志蛋白与功能蛋白表达情况 | 第84-85页 |
| 4 讨论 | 第85-87页 |
| 5 本章小结 | 第87-88页 |
| 第五章 体外构建组织工程全层人角膜的实验研究 | 第88-105页 |
| 1 材料与用品 | 第88-91页 |
| 1.1 实验材料 | 第88页 |
| 1.2 实验仪器 | 第88-89页 |
| 1.3 实验耗材 | 第89页 |
| 1.4 实验试剂 | 第89-90页 |
| 1.5 主要试剂配制 | 第90-91页 |
| 2 实验方法 | 第91-95页 |
| 2.1 鱼类胶原蛋白支架的制备和火菌处理 | 第91-92页 |
| 2.1.1 鱼类胶原蛋白支架制备 | 第91页 |
| 2.1.2 鱼类胶原蛋白支架的灭菌处理 | 第91-92页 |
| 2.2 种子细胞接种天数的优化 | 第92-93页 |
| 2.2.1 接种前鱼类胶原蛋白支架的处理 | 第92页 |
| 2.2.2 HCEP细胞的CFSE标记与接种天数优化 | 第92页 |
| 2.2.3 HCS细胞的Dil标记与接种天数优化 | 第92页 |
| 2.2.4 HCE细胞的Celltrace标记与接种天数优化 | 第92页 |
| 2.2.5 冰冻切片与HE检测 | 第92页 |
| 2.2.6 细胞标记物荧光观察 | 第92-93页 |
| 2.3 TE-flHC的体外构建 | 第93页 |
| 2.4 体外构建的TE-flHC的鉴定 | 第93-95页 |
| 2.4.1 光学透明度与透光率 | 第93页 |
| 2.4.2 冰冻切片与HE检测 | 第93页 |
| 2.4.3 TE-flHC内皮的茜素红染色 | 第93-94页 |
| 2.4.4 细胞标记物焚光观察 | 第94页 |
| 2.4.5 扫描电镜检测 | 第94页 |
| 2.4.6 透射电镜检测 | 第94页 |
| 2.4.7 免疫组织化学检测 | 第94-95页 |
| 3 结果 | 第95-102页 |
| 3.1 种子细胞接种大数的优化 | 第95-98页 |
| 3.1.1 HCEP细胞接种天数优化 | 第95-96页 |
| 3.1.2 HCS细胞接种天数优化 | 第96-97页 |
| 3.1.3 HCE细胞接种天数优化 | 第97-98页 |
| 3.2 TE-flHC的透光性能检测 | 第98-99页 |
| 3.3 TE-flHC组织结构观察 | 第99-100页 |
| 3.4 TE-flHC的超微结构观察 | 第100-101页 |
| 3.5 TE-flHC的生物学功能检测 | 第101-102页 |
| 4 讨论 | 第102-104页 |
| 5 本章小结 | 第104-105页 |
| 全文总结 | 第105-107页 |
| 参考文献 | 第107-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 个人简历 | 第119页 |
