| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-9页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-30页 |
| 1.1 肌醇的发现及命名 | 第14页 |
| 1.2 肌醇在动植物中的作用 | 第14-16页 |
| 1.2.1 肌醇在植物中的作用 | 第14-16页 |
| 1.2.2 肌醇在动物中的作用 | 第16页 |
| 1.3 肌醇及其衍生物的代谢 | 第16-22页 |
| 1.3.1 肌醇的合成途径 | 第16-17页 |
| 1.3.2 肌醇的降解途径 | 第17-18页 |
| 1.3.3 肌醇甲基化衍生物和糖苷类衍生物 | 第18-19页 |
| 1.3.4 多磷酸肌醇 | 第19-20页 |
| 1.3.5 磷脂酰肌醇及磷酸化的磷脂酰肌醇 | 第20-22页 |
| 1.4 肌醇与抗坏血酸的关系 | 第22-23页 |
| 1.5 肌醇合成和降解途径关键酶研究进展 | 第23-27页 |
| 1.5.1 肌醇1磷酸合酶 | 第23-25页 |
| 1.5.2 肌醇单磷酸酶 | 第25-26页 |
| 1.5.3 肌醇加氧酶 | 第26-27页 |
| 1.6 猕猴桃中肌醇研究现状 | 第27-28页 |
| 1.7 本研究的目的和意义 | 第28-30页 |
| 第二章 猕猴桃肌醇1磷酸合酶、肌醇加氧酶基因克隆及表达分析 | 第30-61页 |
| 2.1 材料、试剂和仪器 | 第30-31页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第30页 |
| 2.1.1.1 植物材料 | 第30页 |
| 2.1.1.2 菌株及质粒 | 第30页 |
| 2.1.2 酶及生化试剂 | 第30页 |
| 2.1.3 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.2 试验方法 | 第31-38页 |
| 2.2.1 美味猕猴桃‘秦美’MIPS的克隆和表达分析 | 第31-33页 |
| 2.2.1.1 猕猴桃RNA的提取 | 第31页 |
| 2.2.1.2 反转录 | 第31页 |
| 2.2.1.3 引物的设计 | 第31页 |
| 2.2.1.4 PCR扩增 | 第31-32页 |
| 2.2.1.5 扩增片段连接中间载体 | 第32页 |
| 2.2.1.6 阳性克隆的筛选与检测 | 第32页 |
| 2.2.1.7 阳性菌液测序 | 第32页 |
| 2.2.1.8 序列分析比对 | 第32页 |
| 2.2.1.9 AdMIPS的亚细胞定位 | 第32页 |
| 2.2.1.10 MIPS在美味猕猴桃果实不同发育期和不同组织的表达分析 | 第32-33页 |
| 2.2.1.11 AdMIPS酶活性的测定 | 第33页 |
| 2.2.1.12 干旱处理和盐处理 | 第33页 |
| 2.2.2 野生种猕猴桃中MIPS的克隆和表达分析 | 第33-34页 |
| 2.2.2.1 RNA的提取和反转录 | 第33页 |
| 2.2.2.2 MIPS基因的克隆、测序和序列分析 | 第33-34页 |
| 2.2.2.3 实时定量PCR | 第34页 |
| 2.2.2.4 MIPS酶活性的测定 | 第34页 |
| 2.2.2.5 肌醇和其它糖类含量的测定 | 第34页 |
| 2.2.3 美味猕猴桃‘秦美’MIOX4的克隆及表达分析 | 第34-38页 |
| 2.2.3.1 RNA的提取和反转录 | 第34页 |
| 2.2.3.2 引物的设计 | 第34-35页 |
| 2.2.3.3 cDNA第一链的合成 | 第35-36页 |
| 2.2.3.4 Rapid Amplification of cDNA Ends （RACE） | 第36-38页 |
| 2.2.3.5 MIOX4的实时定量分析 | 第38页 |
| 2.2.4 数据分析 | 第38页 |
| 2.3 结果与分析 | 第38-59页 |
| 2.3.1 美味猕猴桃‘秦美’MIPS的克隆和表达分析 | 第38-47页 |
| 2.3.1.1 猕猴桃RNA的提取 | 第38-39页 |
| 2.3.1.2 反转录cDNA | 第39页 |
| 2.3.1.3 扩增片段的克隆 | 第39页 |
| 2.3.1.4 测序结果的分析 | 第39-43页 |
| 2.3.1.5 AdMIPS的亚细胞定位 | 第43-44页 |
| 2.3.1.6 实时定量PCR分析 | 第44-45页 |
| 2.3.1.7 MIPS酶活性分析 | 第45页 |
| 2.3.1.8 干旱和盐胁迫下美味猕猴桃MIPS的表达分析 | 第45-47页 |
| 2.3.2 野生种猕猴桃中MIPS的克隆和表达分析 | 第47-57页 |
| 2.3.2.1 栽培种和野生种猕猴桃MIPS序列分析和比对 | 第47-53页 |
| 2.3.2.2 实时定量PCR分析 | 第53-54页 |
| 2.3.2.3 MIPS酶活性分析 | 第54-55页 |
| 2.3.2.4 肌醇和其它糖类的含量及比例分析 | 第55-57页 |
| 2.3.3 美味猕猴桃MIOX的克隆及表达分析 | 第57-59页 |
| 2.3.3.1 3’ RACE | 第57页 |
| 2.3.3.2 5’ RACE | 第57-58页 |
| 2.3.3.3 序列拼接 | 第58页 |
| 2.3.3.4 MIOX4在不同组织中的表达 | 第58-59页 |
| 2.4 小结 | 第59-61页 |
| 第三章 猕猴桃MIPS基因干扰对抗坏血酸形成、植株形态和抗逆性的影响 | 第61-89页 |
| 3.1 材料、试剂和仪器 | 第61-62页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第61页 |
| 3.1.1.1 植物材料 | 第61页 |
| 3.1.1.2 菌株及质粒 | 第61页 |
| 3.1.2 酶及生化试剂 | 第61页 |
| 3.1.3 主要仪器 | 第61-62页 |
| 3.2 试验方法 | 第62-66页 |
| 3.2.1 干扰载体的构建 | 第62-63页 |
| 3.2.2 外植体的建立 | 第63页 |
| 3.2.3 转化猕猴桃 | 第63-64页 |
| 3.2.4 抗性植株的Southern杂交检测 | 第64-65页 |
| 3.2.5 AdMIPS在转基因植株中的表达 | 第65页 |
| 3.2.6 肌醇和可溶性糖含量的测定 | 第65页 |
| 3.2.7 抗坏血酸含量的测定 | 第65页 |
| 3.2.8 其它生理指标的测定 | 第65页 |
| 3.2.9 转基因植株的干旱和盐胁迫处理及指标测定 | 第65-66页 |
| 3.2.9.1 干旱和盐胁迫处理 | 第65页 |
| 3.2.9.2 指标测定 | 第65-66页 |
| 3.2.10 数据分析 | 第66页 |
| 3.3 结果与分析 | 第66-88页 |
| 3.3.1 抗性植株的检测 | 第66-68页 |
| 3.3.1.1 DNA水平的PCR检测和Southern杂交检测 | 第66-68页 |
| 3.3.1.2 cDNA水平的PCR检测 | 第68页 |
| 3.3.2 转基因植株叶片AdMIPS表达分析 | 第68-69页 |
| 3.3.3 叶片肌醇和抗坏血酸含量的检测 | 第69-70页 |
| 3.3.4 转基因植株生理指标的测定 | 第70-74页 |
| 3.3.5 干旱和盐胁迫下转基因植株生理指标和基因表达测定 | 第74-88页 |
| 3.4 小结 | 第88-89页 |
| 第四章 讨论 | 第89-94页 |
| 4.1 猕猴桃MIPS的高度保守性 | 第89页 |
| 4.2 幼果期是猕猴桃肌醇积累的主要时期 | 第89-90页 |
| 4.3 猕猴桃MIPS受非生物逆境的调控 | 第90-91页 |
| 4.4 猕猴桃MIPS在各组织中分布的普遍性 | 第91-92页 |
| 4.5 降低猕猴桃肌醇含量对抗坏血酸含量和抗逆性的影响 | 第92-94页 |
| 第五章 结论和主要创新点 | 第94-96页 |
| 参考文献 | 第96-110页 |
| 缩略词 | 第110-112页 |
| 致谢 | 第112-113页 |
| 作者简介 | 第113页 |
