| 摘要 | 第4-5页 |
| abstract | 第5页 |
| 缩略词 | 第13-14页 |
| 第一章 文献综述 | 第14-26页 |
| 1.1 果实成熟机理研究 | 第14-17页 |
| 1.1.1 果实成熟及类型 | 第14-15页 |
| 1.1.2 番茄果实成熟相关突变体 | 第15页 |
| 1.1.3 转录因子调控番茄的果实成熟 | 第15-17页 |
| 1.2 Ripening inhibitor (rin)番茄的研究进展 | 第17页 |
| 1.2.1 rin突变体的生理特征 | 第17页 |
| 1.2.2 番茄rin突变体果实成熟异常的分子机理 | 第17页 |
| 1.3 番茄果实成熟相关因子MADS-RIN功能的研究方法 | 第17-18页 |
| 1.3.1 比较组学在阐明RIN调控果实成熟中的应用 | 第17-18页 |
| 1.3.2 存在的问题及展望 | 第18页 |
| 1.4 果实成熟相关转录因子作用模式的研究方法 | 第18-23页 |
| 1.4.1 病毒诱导的基因沉默(VIGS)技术 | 第18-19页 |
| 1.4.2 植物遗传转化技术 | 第19-20页 |
| 1.4.3 融合报告基因亚细胞定位技术 | 第20页 |
| 1.4.4 染色质免疫共沉淀(ChIP)和凝胶阻滞(EMSA)技术 | 第20-21页 |
| 1.4.5 双元荧光素酶(LUC/REN)系统 | 第21页 |
| 1.4.6 蛋白-蛋白互作研究方法 | 第21-23页 |
| 1.5 本研究的目的与意义 | 第23-24页 |
| 1.5.1 研究目的 | 第23页 |
| 1.5.2 研究意义 | 第23-24页 |
| 1.6 研究的内容与技术路线 | 第24-26页 |
| 1.6.1 研究内容 | 第24页 |
| 1.6.2 技术路线 | 第24-26页 |
| 第二章 番茄rin突变体果实中RIN-MC的表达模式及功能初探 | 第26-39页 |
| 2.1 材料与方法 | 第26-32页 |
| 2.1.1 番茄果实的选取 | 第26-27页 |
| 2.1.2 菌株和质粒 | 第27页 |
| 2.1.3 试剂与仪器设备 | 第27页 |
| 2.1.4 其他试剂的配制 | 第27-28页 |
| 2.1.5 外源乙烯和1-MCP处理番茄果实 | 第28页 |
| 2.1.6 番茄果实总RNA提取和cDNA合成 | 第28-29页 |
| 2.1.7 实时荧光定量RT-qPCR | 第29-30页 |
| 2.1.8 TRV沉默载体的构建 | 第30-31页 |
| 2.1.9 VIGS侵染液的制备与侵染 | 第31-32页 |
| 2.1.10 RNA-seq高通量测序 | 第32页 |
| 2.1.11 转录组数据处理及基因表达可视化 | 第32页 |
| 2.2 结果与分析 | 第32-37页 |
| 2.2.1 突变体rin番茄果实中RIN(RIN-MC)基因的表达情况 | 第32-34页 |
| 2.2.2 乙烯和1-MCP处理对RIN-MC基因表达水平的影响 | 第34页 |
| 2.2.3 番茄rin突变体中RIN-MC基因的沉默对成熟相关基因表达水平的影响 | 第34-36页 |
| 2.2.4 番茄rin突变体中RIN-MC基因的沉默对转录组水平的影响 | 第36-37页 |
| 2.3 讨论 | 第37-38页 |
| 2.4 本章小结 | 第38-39页 |
| 第三章 番茄rin突变体中融合RIN-MC蛋白的表达及作用机制 | 第39-56页 |
| 3.1 材料与方法 | 第39-44页 |
| 3.1.1 试验材料 | 第39页 |
| 3.1.2 菌株和质粒 | 第39页 |
| 3.1.3 试剂与仪器设备 | 第39页 |
| 3.1.4 其他试剂的配制 | 第39-41页 |
| 3.1.5 生物信息学分析番茄RIN-MC基因CDS序列 | 第41页 |
| 3.1.6 番茄果实总RNA提取与cDNA合成 | 第41页 |
| 3.1.7 相关载体的构建 | 第41-42页 |
| 3.1.8 番茄RIN和RIN-MC蛋白多克隆兔源抗体的制备及检测 | 第42页 |
| 3.1.9 农杆菌介导的烟草体系瞬时超表达蛋白 | 第42-43页 |
| 3.1.10 番茄果实核蛋白提取方法 | 第43页 |
| 3.1.11 蛋白印迹分析 | 第43页 |
| 3.1.12 PEG介导烟草BY2细胞原生质体瞬时表达 | 第43-44页 |
| 3.1.13 双分子荧光互补BiFC | 第44页 |
| 3.1.14 CoIP方法 | 第44页 |
| 3.1.15 双荧光素酶(LUC/REN)化学发光的检测方法 | 第44页 |
| 3.2 结果与分析 | 第44-54页 |
| 3.2.1 生物信息学分析RIN-MC基因CDS序列 | 第44-45页 |
| 3.2.2 相关载体的构建 | 第45-46页 |
| 3.2.3 烟草瞬时体系RIN和RIN-MC蛋白的表达结果 | 第46-47页 |
| 3.2.4 番茄AC::35S-Flag-4myc-RIN-MC转基因植株的鉴定及基因表达分析 | 第47-48页 |
| 3.2.5 番茄果实成熟过程中RIN和RIN-MC的蛋白表达水平 | 第48-50页 |
| 3.2.6 番茄RIN和RIN-MC蛋白定位 | 第50-51页 |
| 3.2.7 RIN和RIN-MC对成熟相关基因的调控模式 | 第51-52页 |
| 3.2.8 RIN和RIN-MC与MADS-box蛋白互作(BiFC) | 第52-53页 |
| 3.2.9 RIN和RIN-MC与MADS-box蛋白互作(CoIP) | 第53-54页 |
| 3.3 讨论 | 第54-55页 |
| 3.4 本章小结 | 第55-56页 |
| 第四章 番茄RIN转录因子调控靶基因的重新分析 | 第56-73页 |
| 4.1 材料与方法 | 第56-59页 |
| 4.1.1 试验材料 | 第56页 |
| 4.1.2 菌株和质粒 | 第56页 |
| 4.1.3 试剂和仪器设备 | 第56-57页 |
| 4.1.4 其他试剂的配制 | 第57页 |
| 4.1.5 番茄果实总RNA的提取与cDNA合成 | 第57页 |
| 4.1.6 pRNAi沉默载体的构建 | 第57页 |
| 4.1.7 番茄的遗传转化及再生植株的鉴定 | 第57-58页 |
| 4.1.8 番茄果实的颜色、硬度和乙烯产生量测定 | 第58页 |
| 4.1.9 番茄果实mRNA文库构建和测序 | 第58页 |
| 4.1.10 差异表达基因(DEGs)分析 | 第58页 |
| 4.1.11 基因功能GO富集分析 | 第58页 |
| 4.1.12 基因功能KEGG代谢富集分析 | 第58-59页 |
| 4.2 结果与分析 | 第59-70页 |
| 4.2.1 番茄AC::RIN RNAi、rin::RIN-MC RNAi再生植株鉴定和基因表达分析 | 第59页 |
| 4.2.2 四种番茄果实成熟过程中色泽、硬度和乙烯产生量的比较 | 第59-63页 |
| 4.2.3 番茄果实中RIN调控与AC/rin的差异基因(DEGs)的比较 | 第63-69页 |
| 4.2.4 番茄果实中RIN调控与AC/rin的差异基因GO功能富集分析 | 第69-70页 |
| 4.2.5 番茄果实中RIN调控与AC/rin的差异基因KEGG代谢富集分析 | 第70页 |
| 4.3 讨论 | 第70-71页 |
| 4.4 本章小结 | 第71-73页 |
| 第五章 类胡萝卜素途径中RIN功能的重新鉴定 | 第73-79页 |
| 5.1 材料与方法 | 第73-74页 |
| 5.1.1 试验材料 | 第73页 |
| 5.1.2 试剂和仪器设备 | 第73页 |
| 5.1.3 其他试剂的配制 | 第73页 |
| 5.1.4 番茄果实总RNA的提取与cDNA合成 | 第73页 |
| 5.1.5 实时荧光定量RT-qPCR | 第73-74页 |
| 5.1.6 液质联用LC-MS测定番茄果实类胡萝卜素 | 第74页 |
| 5.2 结果与分析 | 第74-77页 |
| 5.2.1 番茄RIN和RIN-MC对果实类胡萝卜素途径基因表达的影响 | 第74-76页 |
| 5.2.2 番茄RIN和RIN-MC对果实类胡萝卜素成分的影响 | 第76-77页 |
| 5.3 讨论 | 第77页 |
| 5.4 本章小结 | 第77-79页 |
| 第六章 RIN对NF-Y转录因子作用模式的重新鉴定 | 第79-97页 |
| 6.1 材料与方法 | 第79-81页 |
| 6.1.1 试验材料 | 第79页 |
| 6.1.2 菌株和质粒 | 第79页 |
| 6.1.3 试剂与仪器设备 | 第79页 |
| 6.1.4 其他试剂的配制 | 第79页 |
| 6.1.5 相关生物信息学分析方法及软件 | 第79-80页 |
| 6.1.6 番茄果实总RNA的提取与cDNA合成 | 第80页 |
| 6.1.7 实时荧光定量RT-qPCR | 第80页 |
| 6.1.8 TRV沉默载体及亚细胞定位载体的构建 | 第80-81页 |
| 6.1.9 VIGS侵染液的制备与侵染 | 第81页 |
| 6.1.10 PEG介导烟草BY2细胞原生质体瞬时表达 | 第81页 |
| 6.2 结果与分析 | 第81-95页 |
| 6.2.1 番茄NF-Y与RIN转录因子对果实成熟调控的联系 | 第81-83页 |
| 6.2.2 番茄NF-Y的相关生物信息学分析 | 第83-86页 |
| 6.2.3 番茄NF-Y的表达模式分析 | 第86-92页 |
| 6.2.4 番茄NF-Y基因的沉默对果实成熟的影响 | 第92-94页 |
| 6.2.5 番茄NF-Y蛋白定位 | 第94-95页 |
| 6.3 讨论 | 第95-96页 |
| 6.4 本章小结 | 第96-97页 |
| 第七章 全文总结与展望 | 第97-100页 |
| 7.1 全文讨论 | 第97页 |
| 7.2 全文总结 | 第97-98页 |
| 7.3 本研究的创新点 | 第98页 |
| 7.4 展望 | 第98-100页 |
| 参考文献 | 第100-107页 |
| 附录Ⅰ | 第107-108页 |
| 附录Ⅱ | 第108-114页 |
| 附录Ⅲ | 第114-117页 |
| 附录Ⅳ | 第117-121页 |
| 致谢 | 第121-122页 |
| 个人简介 | 第122页 |
