| 摘要 | 第5-6页 |
| Abstract | 第6页 |
| 英文缩略语 | 第7-13页 |
| 1 前言 | 第13-20页 |
| 1.1 低血糖性脑损伤 | 第13-17页 |
| 1.1.1 认知障碍 | 第15页 |
| 1.1.2 癫痫 | 第15-16页 |
| 1.1.3 昏迷与脑水肿 | 第16-17页 |
| 1.2 星形胶质细胞在脑水肿形成中的作用 | 第17-18页 |
| 1.3 研究内容及意义 | 第18-20页 |
| 2 材料与方法 | 第20-47页 |
| 2.1 实验材料 | 第20-23页 |
| 2.1.1 实验动物与细胞系 | 第20页 |
| 2.1.2 载体质粒 | 第20-21页 |
| 2.1.3 主要实验试剂 | 第21-22页 |
| 2.1.4 主要实验器械和仪器 | 第22-23页 |
| 2.2 主要试剂的配置 | 第23-25页 |
| 2.3 采用主要软件 | 第25-26页 |
| 2.4 实验方法 | 第26-47页 |
| 2.4.1 分离及培养原代星形胶质细胞 | 第26页 |
| 2.4.2 CTX TNA2细胞的培养与传代 | 第26-27页 |
| 2.4.3 低血糖时AST和CTX TNA2星形胶质细胞体积的检测 | 第27-28页 |
| 2.4.4 AQP4在AST和CTX TNA2星形胶质细胞中的表达 | 第28-30页 |
| 2.4.5 提取大鼠脑部组织总RNA | 第30-31页 |
| 2.4.6 AQP4目的基因的扩增 | 第31-35页 |
| 2.4.6.1 逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR反应）过程(参考ReverTra Ace qPCR RT Kit说明书) | 第31页 |
| 2.4.6.2 巢式PCR反应过程 | 第31-34页 |
| 2.4.6.3 PCR反应产物的提取与纯化 | 第34-35页 |
| 2.4.7 pEGFP-C2-AQP4-M23重组质粒的构建 | 第35-36页 |
| 2.4.8 转化DH5α 感受态细胞 | 第36-37页 |
| 2.4.9 单克隆细菌菌落的挑取与培养 | 第37页 |
| 2.4.10 质粒的提取与纯化 | 第37-38页 |
| 2.4.11 pEGFP-C2-AQP4-M23重组质粒的鉴定 | 第38-40页 |
| 2.4.11.1 酶切鉴定 | 第38-39页 |
| 2.4.11.2 pEGFP-C2-AQP4-M23重组质粒转染 293T细胞，检测AQP4蛋白的表达情况 | 第39-40页 |
| 2.4.12 低血糖时水通道蛋白4对星形胶质细胞体积的影响 | 第40-41页 |
| 2.4.13 抑制水通道蛋白4对低血糖性星形胶质细胞水肿的影响 | 第41-42页 |
| 2.4.13.1 原代星形胶质细胞的准备 | 第41页 |
| 2.4.13.2 转染AQP4 siRNA抑制原代星形胶质细胞中AQP4的表达 | 第41-42页 |
| 2.4.13.3 实验分组和低血糖条件处理 | 第42页 |
| 2.4.14 AQP4介导低血糖性星形胶质细胞水肿的作用位点的研究 | 第42-45页 |
| 2.4.14.1 构建AQP4 M23突变体 | 第42-44页 |
| 2.4.14.2 转化DH5α 感受态细胞 | 第44页 |
| 2.4.14.3 单克隆细菌菌落的挑取与培养 | 第44-45页 |
| 2.4.14.4 S111A-AQP4 M23和S180A-AQP4 M23突变质粒的提取与纯化 | 第45页 |
| 2.4.14.5 S111A-AQP4 M23和S180A-AQP4 M23突变质粒的测序鉴定 | 第45页 |
| 2.4.15 AQP4蛋白第111位和第180位丝氨酸磷酸化对低血糖时星形胶质细胞水肿形成的影响 | 第45-47页 |
| 3 实验结果 | 第47-68页 |
| 3.1 低血糖时原代星形胶质细胞（AST）体积增大而星形胶质细胞系（CTX TNA2）体积未发生变化 | 第47-49页 |
| 3.1.1 原代星形胶质细胞低血糖时的细胞体积变化 | 第48-49页 |
| 3.1.1.1 细胞形态变化 | 第48页 |
| 3.1.1.2 细胞体积的统计学结果 | 第48-49页 |
| 3.1.2 星形胶质细胞系（CTX TNA2）低血糖时的细胞体积变化 | 第49页 |
| 3.1.2.1 细胞形态变化 | 第49页 |
| 3.1.2.2 细胞体积的统计学结果 | 第49页 |
| 3.2 水通道蛋白4在AST细胞中有明显表达，而在CTX TNA2星形胶质细胞中没有表达 | 第49-51页 |
| 3.2.1 细胞免疫荧光结果 | 第50页 |
| 3.2.2 Western Blot实验结果 | 第50-51页 |
| 3.3 大鼠脑部组织总RNA的浓度与纯度检测 | 第51页 |
| 3.4 AQP4目的片段扩增产物的获得 | 第51-52页 |
| 3.5 pEGFP-C2-AQP4-M23重组质粒的鉴定结果初步表明质粒构建成功 | 第52-56页 |
| 3.5.1 酶切鉴定结果 | 第52-54页 |
| 3.5.2 pEGFP-C2-AQP4-M23重组质粒测序结果显示表达质粒构建成功 | 第54-55页 |
| 3.5.3 荧光显微镜检测转染效果显示表达质粒能够成功表达绿荧光蛋白 | 第55-56页 |
| 3.5.4 Western Blot结果显示重组质粒可以成功表达AQP4蛋白 | 第56页 |
| 3.6 重组质粒pEGFP-C2-AQP4-M23在CTX TNA2细胞中的表达与定位 | 第56-58页 |
| 3.7 转染AQP4的CTX TNA2细胞在低血糖诱导条件下发生细胞水肿 | 第58-59页 |
| 3.7.1 LSCM扫描图像结果 | 第58-59页 |
| 3.7.2 细胞体积的统计学分析 | 第59页 |
| 3.8 抑制原代星形胶质细胞AQP4的表达后低血糖引起星形胶质细胞水肿的现象消失 | 第59-64页 |
| 3.8.1 时间对AQP4 SiRNA抑制AQP4蛋白表达效果的影响 | 第59-60页 |
| 3.8.2 抑制原代星形胶质细胞AQP4的表达后低血糖时星形胶质细胞的体积变化 | 第60-64页 |
| 3.8.2.1 低血糖条件下转染AQP4 SiRNA的原代星形胶质细胞表达AQP4蛋白情况 | 第60-61页 |
| 3.8.2.2 低血糖条件下转染AQP4 SiRNA的原代星形胶质细胞形态变化 | 第61-62页 |
| 3.8.2.3 抑制原代星形胶质细胞AQP4蛋白的表达后，低血糖条件下细胞体积无明显变化 | 第62-64页 |
| 3.9 AQP4介导低血糖性星形胶质细胞水肿的作用位点为111位丝氨酸 | 第64-68页 |
| 3.9.1 S111A AQP4 M23和S180A AQP4 M23突变体的构建 | 第64-65页 |
| 3.9.2 S111A AQP4 M23和S180A AQP4 M23突变体对低血糖性星形胶质细胞水肿形成的影响 | 第65-68页 |
| 3.9.2.1 S111A AQP4 M23和S180A AQP4 M23突变体对低血糖性星形胶质细胞形态变化的影响 | 第65-66页 |
| 3.9.2.2 各组细胞体积的统计学分析 | 第66-68页 |
| 4 讨论 | 第68-73页 |
| 5 结论与展望 | 第73-74页 |
| 6 参考文献 | 第74-78页 |
| 致谢 | 第78-79页 |
| 学术论文和科研成果目录 | 第79页 |
| 学术论文 | 第79页 |
| 专利 | 第79页 |
