| 摘要 | 第10-11页 |
| Abstract | 第11页 |
| 1 文献综述 | 第12-26页 |
| 1.1 冷应激的研究进展 | 第12-13页 |
| 1.1.1 冷应激的概念 | 第12页 |
| 1.1.2 冷应激的影响 | 第12-13页 |
| 1.2 miRNA的研究进展 | 第13-15页 |
| 1.2.1 miRNA的作用机制 | 第14-15页 |
| 1.3 miRNA与冷应激 | 第15-17页 |
| 1.3.1 冷应激条件下的miRNA与植物 | 第15-16页 |
| 1.3.2 冷应激条件下的miRNA与动物 | 第16-17页 |
| 1.4 miRNA的研究方法 | 第17-19页 |
| 1.4.1 miRNA的定量检测 | 第17-18页 |
| 1.4.2 miRNA靶基因的筛选 | 第18-19页 |
| 1.4.3 miRNA靶基因的验证 | 第19页 |
| 1.5 miR-210 的研究进展 | 第19-23页 |
| 1.5.1 miR-210 的功能 | 第19页 |
| 1.5.2 miR-210 的靶基因及其功能 | 第19-23页 |
| 1.6 miRNA与冷应激的研究前景 | 第23-26页 |
| 2 材料与方法 | 第26-47页 |
| 2.1 冷应激大鼠肝脏中miR-210 的差异表达 | 第26-30页 |
| 2.1.1 试验材料 | 第26-27页 |
| 2.1.2 肝脏样品采集 | 第27页 |
| 2.1.3 肝脏总RNA提取及qRT-PCR | 第27-29页 |
| 2.1.4 设计分组与统计分析 | 第29页 |
| 2.1.5 miR-210 的生物信息学分析 | 第29-30页 |
| 2.2 大鼠肝细胞系中miR-210 上调和下调条件的确定 | 第30-36页 |
| 2.2.1 试验试剂与耗材 | 第30页 |
| 2.2.2 主要仪器 | 第30-31页 |
| 2.2.3 试验试剂的配置 | 第31页 |
| 2.2.4 大鼠肝细胞系的培养 | 第31-33页 |
| 2.2.5 mimics和inhibitor的设计合成 | 第33页 |
| 2.2.6 miRNA的转染 | 第33页 |
| 2.2.7 设计分组 | 第33-34页 |
| 2.2.8 细胞总RNA提取及qRT-PCR | 第34-36页 |
| 2.2.9 统计分析 | 第36页 |
| 2.3 miR-210 靶基因的筛选验证 | 第36-42页 |
| 2.3.1 试验试剂和耗材 | 第36页 |
| 2.3.2 主要仪器 | 第36页 |
| 2.3.3 主要溶液的配置 | 第36-37页 |
| 2.3.4 miR-210 的上调和抑制以及引物设计 | 第37-38页 |
| 2.3.5 细胞总RNA的提取及qRT-PCR检测 | 第38-39页 |
| 2.3.6 总蛋白的提取和Western Blot检测 | 第39-41页 |
| 2.3.7 统计分析 | 第41-42页 |
| 2.4 miR-210 上调和抑制对大鼠肝细胞凋亡以及增殖的影响 | 第42-44页 |
| 2.4.1 试剂与耗材 | 第42-43页 |
| 2.4.2 细胞凋亡检测 | 第43页 |
| 2.4.3 细胞增殖的检测 | 第43-44页 |
| 2.4.4 统计分析 | 第44页 |
| 2.5 冷应激对大鼠肝脏miR-210 靶基因的影响 | 第44-47页 |
| 2.5.1 主要试剂与耗材 | 第44-45页 |
| 2.5.2 主要仪器 | 第45页 |
| 2.5.3 RNA提取以及qRT-PCR检测 | 第45-46页 |
| 2.5.4 统计分析 | 第46-47页 |
| 3 结果与分析 | 第47-60页 |
| 3.1 冷应激大鼠肝脏中miR-210 的差异表达 | 第47-49页 |
| 3.1.1 总RNA质量检测结果 | 第47页 |
| 3.1.2 qRT-PCR引物特异性检验结果 | 第47-48页 |
| 3.1.3 qRT-PCR的分析结果 | 第48页 |
| 3.1.4 miR-210 的生物信息学分析结果 | 第48-49页 |
| 3.2 大鼠肝细胞系中miR-210 上调和下调条件的确定 | 第49-52页 |
| 3.3 miR-210 靶基因的筛选验证 | 第52-55页 |
| 3.3.1 上调miR-210 后靶基因的相对表达量 | 第52-53页 |
| 3.3.2 下调miR-210 后靶基因的相对表达量 | 第53-54页 |
| 3.3.3 上调miR-210 和下调miR-210 后靶蛋白的相对表达量 | 第54-55页 |
| 3.4 miR-210 上调和抑制对大鼠肝细胞凋亡以及增殖的影响 | 第55-58页 |
| 3.5 冷应激对大鼠肝脏miR-210 靶基因的影响 | 第58-60页 |
| 4 讨论 | 第60-64页 |
| 4.1 冷应激大鼠肝脏中miR-210 的差异表达 | 第60-61页 |
| 4.2 大鼠肝细胞系中miR-210 上调和下调条件的确定 | 第61页 |
| 4.3 miR-210 靶基因的筛选验证 | 第61页 |
| 4.4 miR-210 上调和抑制对大鼠肝细胞死亡以及增殖的影响 | 第61-62页 |
| 4.5 冷应激对大鼠肝脏miR-210 靶基因的影响 | 第62-64页 |
| 5 结论 | 第64-66页 |
| 5.1 冷应激大鼠肝脏中miR-210 的差异表达 | 第64页 |
| 5.2 大鼠肝细胞系中miR-210 上调和下调条件的确定 | 第64页 |
| 5.3 miR-210 靶基因的筛选验证 | 第64页 |
| 5.4 miR-210 上调和抑制对大鼠肝细胞凋亡以及增殖的影响 | 第64页 |
| 5.5 冷应激对大鼠肝脏miR-210 靶基因的影响 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-74页 |
| 致谢 | 第74-76页 |
| 个人简历 | 第76页 |
