| 中文摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 引言 | 第10-16页 |
| 一、日珠蛋白基因簇 | 第11-12页 |
| 二、转录因子Ikaros | 第12-13页 |
| 三、RANi技术的发展 | 第13-15页 |
| 研究路线 | 第15-16页 |
| 第1章 细胞培养及转染条件的优化 | 第16-24页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·试剂材料与溶液配置方法 | 第16-17页 |
| ·主要设备和仪器 | 第17-18页 |
| ·方法 | 第18-20页 |
| ·K562细胞的复苏,常规培养,形态观察,冻存 | 第18-19页 |
| ·瞬时转染,转染方法及转染效率检测方法 | 第19-20页 |
| ·结果 | 第20-22页 |
| ·倒置显微镜下观察K562细胞形态 | 第20页 |
| ·转染前后细胞形态对比 | 第20-21页 |
| ·转染条件及转染效率 | 第21-22页 |
| ·讨论 | 第22-24页 |
| 第2章 Ikaros siRNA的设计及效果验证 | 第24-34页 |
| ·材料 | 第24-26页 |
| ·试剂材料与溶液配置方法 | 第24-25页 |
| ·主要设备和仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-29页 |
| ·si设计原则及方法 | 第26-27页 |
| ·瞬时转染 | 第27页 |
| ·提取RNA | 第27页 |
| ·RT-PCR检测Ikaros表达情况 | 第27-29页 |
| ·统计方法 | 第29页 |
| ·基因表达抑制率的计算 | 第29页 |
| ·siRNA干扰效果特异性验证 | 第29页 |
| ·结果 | 第29-31页 |
| ·收集转染后48h细胞,提取RNA | 第29-30页 |
| ·RT-PCR检测靶基因Ikaros的表达 | 第30-31页 |
| ·讨论 | 第31-34页 |
| 第3章 干扰Ikaros对γ珠蛋白表达量的影响 | 第34-47页 |
| ·材料 | 第34-37页 |
| ·试剂材料与溶液配置方法 | 第35-36页 |
| ·主要设备和仪器 | 第36-37页 |
| ·方法 | 第37-41页 |
| ·细胞培养 | 第37页 |
| ·瞬时转染,并收集相应时间段细胞提取RNA,收集蛋白进行相应检测 | 第37页 |
| ·绘制细胞生长曲线 | 第37页 |
| ·联苯胺染色计数阳性细胞率 | 第37页 |
| ·收集细胞提取RNA | 第37页 |
| ·RT-PCR检测Ikaros表达情况,荧光定量PCR检测γ珠蛋白表达情况 | 第37-39页 |
| ·WB检测Ikaros和γ珠蛋白蛋白水平的表达情况 | 第39-41页 |
| ·统计学分析 | 第41页 |
| ·结果 | 第41-44页 |
| ·细胞生长曲线 | 第41-42页 |
| ·联苯胺染色阳性细胞率 | 第42页 |
| ·RT-PCR扩增Ikaros,γ珠蛋白结果 | 第42-43页 |
| ·荧光定量PCR扩增γ珠蛋白结果 | 第43-44页 |
| ·WB结果 | 第44页 |
| ·讨论 | 第44-47页 |
| 参考文献 | 第47-51页 |
| 附录 | 第51-58页 |
| 附录一 | 第51-53页 |
| 附录二 | 第53-58页 |
| 研究生期间发表文章 | 第58-59页 |
| 致谢 | 第59页 |
