| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第14-21页 |
| 1. Smarca2基因与SWI/SNF复合物 | 第14页 |
| 2. Smarca2基因的可变剪接 | 第14-17页 |
| 2.1 mSmarca2的可变剪接变体 | 第15-16页 |
| 2.2 hSmarca2的可变剪接 | 第16-17页 |
| 3. BRM‐b蛋白异构体结构 | 第17-19页 |
| 3.1 AT‐Hook模体 | 第17页 |
| 3.2 溴区结构域 | 第17-18页 |
| 3.3 溴区结构域与乙酰化赖氨酸 | 第18-19页 |
| 4. Smarca2‐b变体及其编码的BRM‐b异构体的研究现状 | 第19-20页 |
| 5. 研究思路和研究意义 | 第20-21页 |
| 第一部分 mSmarca2‐b在C57BL/6小鼠组织中的表达情况 | 第21-28页 |
| 1. 材料与方法 | 第21-25页 |
| 1.1 实验材料 | 第21-22页 |
| 1.1.1 试剂耗材及厂商 | 第21-22页 |
| 1.1.2 仪器设备 | 第22页 |
| 1.1.3 引物序列 | 第22页 |
| 1.2. 实验方法 | 第22-25页 |
| 1.2.1 小鼠组织的处理 | 第22页 |
| 1.2.2 小鼠组织总RNA提取 | 第22-24页 |
| 1.2.3 RT‐PCR | 第24页 |
| 1.2.4 电泳 | 第24-25页 |
| 2. 实验结果 | 第25-27页 |
| 2.1 mSmarca2‐a/b在各生长阶段C57BL/6小鼠组织中的表达 | 第25-26页 |
| 2.2 mSmarca2‐a/b在各生长阶段C57BL/6小鼠大脑各结构中的表达 | 第26-27页 |
| 3. 讨论 | 第27页 |
| 4. 小结 | 第27-28页 |
| 第二部分 hSmarca2‐b过表达载体的构建、表达验证及定位 | 第28-50页 |
| 1. 引言 | 第28页 |
| 2. 材料与方法 | 第28-42页 |
| 2.1 实验材料 | 第28-31页 |
| 2.1.1 实验试剂耗材及厂商 | 第28-29页 |
| 2.1.2 仪器设备 | 第29-30页 |
| 2.1.3 构建过表达载体所需材料 | 第30-31页 |
| 2.1.4 引物序列 | 第31页 |
| 2.2 实验方法 | 第31-42页 |
| 2.2.1 感受态细胞的制备 | 第31-32页 |
| 2.2.2 质粒的转化、扩增及酶切 | 第32-34页 |
| 2.2.3 hSmarca2‐b部分cDNA序列插入片段制备 | 第34-37页 |
| 2.2.4 质粒的重组 | 第37-38页 |
| 2.2.6 质粒的转染 | 第38-39页 |
| 2.2.7 RT‐PCR证实载体的过表达 | 第39页 |
| 2.2.8 Western‐Blot证实hBRM‐b‐EGFP融合蛋白的表达 | 第39-42页 |
| 2.2.9 hBRM‐b‐EGFP融合蛋白在细胞中的分布 | 第42页 |
| 3. 实验结果 | 第42-49页 |
| 3.1 过表达载体测序结果 | 第42-43页 |
| 3.2 各hSmarca2‐b转录变体编码的hBRM‐b蛋白质序列 | 第43-44页 |
| 3.3 mRNA水平验证Hep‐3B细胞中hSmarca2‐b的过表达 | 第44-45页 |
| 3.4 蛋白质水平验证hBRM‐b‐EGFP融合蛋白的表达 | 第45-46页 |
| 3.5 细胞转染后细胞中hBRM‐b异构体的定位 | 第46-48页 |
| 3.6 hBRM‐b的核定位信号分析 | 第48-49页 |
| 4. 小结 | 第49-50页 |
| 第三部分 hBRM‐b蛋白异构体在肿瘤生物学功能的初步研究 | 第50-58页 |
| 1. 引言 | 第50页 |
| 2. 材料与方法 | 第50-53页 |
| 2.1 实验材料 | 第50-51页 |
| 2.1.1 人源细胞系 | 第50-51页 |
| 2.1.2 实验材料及厂商 | 第51页 |
| 2.1.3 主要仪器设备 | 第51页 |
| 2.2. 实验方法 | 第51-53页 |
| 2.2.1 细胞总RNA提取 | 第51-52页 |
| 2.2.2 hBRM‐b‐EGFP融合蛋白的过表达对Hep‐3B细胞凋亡影响的检测 | 第52页 |
| 2.2.3 hBRM‐b‐EGFP融合蛋白的过表达对Hep‐3B细胞迁移能力影响的检测 | 第52-53页 |
| 2.2.4 转染h BRM‐b‐EGFP过表达载体对细胞增殖影响的检测 | 第53页 |
| 3. 实验结果 | 第53-56页 |
| 3.1 hSmarca2‐a/b在多种人源细胞系中的表达情况 | 第53-54页 |
| 3.2 Hep‐3B细胞转染hBRM‐b‐EGFP过表达载体 48h后细胞凋亡检测 | 第54-55页 |
| 3.3 hBRM‐b‐EGFP过表达载体的转染对细胞迁移能力影响检测 | 第55页 |
| 3.4 各种hSmarca2‐b转录变体的过表达对Hep‐3B细胞增殖的影响 | 第55-56页 |
| 4. 讨论 | 第56-57页 |
| 5. 小结 | 第57-58页 |
| 全文总结 | 第58-59页 |
| 攻读学位期间的研究成果 | 第59-60页 |
| 参考文献 | 第60-63页 |
| 文献综述 | 第63-70页 |
| 参考文献 | 第67-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
