| 中文摘要 | 第14-17页 |
| ABSTRACT | 第17-19页 |
| 第一章 文献综述 | 第20-35页 |
| 1 蛋白质合成 | 第20-21页 |
| 1.1 核糖体的结构与形成 | 第20-21页 |
| 1.2 核糖体蛋白的分类与功能 | 第21页 |
| 2 酸性核糖体磷酸化蛋白的研究进展 | 第21-31页 |
| 2.1 酸性核糖体磷酸化蛋白概述 | 第21-22页 |
| 2.2 酸性核糖体磷酸化蛋白的化学结构 | 第22-25页 |
| 2.2.1 N末端结构域 | 第23-24页 |
| 2.2.2 连接区 | 第24页 |
| 2.2.3 C末端结构域 | 第24-25页 |
| 2.3 酸性核糖体磷酸化蛋白与核糖体失活蛋白 | 第25-26页 |
| 2.4 酸性核糖体磷酸化蛋白的磷酸化作用 | 第26-28页 |
| 2.4.1 蛋白激酶CK2 | 第26-27页 |
| 2.4.2 酸性核糖体蛋白的磷酸化作用 | 第27-28页 |
| 2.5 酸性核糖体磷酸化蛋白参与蛋白合成延伸过程 | 第28-30页 |
| 2.5.1 延伸因子 | 第28-29页 |
| 2.5.2 酸性核糖体磷酸化蛋白参与蛋白延伸过程 | 第29-30页 |
| 2.6 酸性核糖体磷酸化蛋白的其他功能 | 第30-31页 |
| 2.6.1 维持生命的稳定性 | 第30页 |
| 2.6.2 参与细胞的增殖 | 第30-31页 |
| 2.6.3 参与肿瘤的发生 | 第31页 |
| 2.6.4 其他功能 | 第31页 |
| 3 纤毛虫 | 第31-32页 |
| 3.1 八肋游仆虫基因结构的特殊性 | 第31-32页 |
| 3.2 八肋游仆虫基因表达的特殊性 | 第32页 |
| 4 本研究的设计思路 | 第32-33页 |
| 5 本研究的创新性 | 第33-35页 |
| 第二章 八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白基因的克隆与序列分析 | 第35-52页 |
| 1 引言 | 第35页 |
| 2 材料与方法 | 第35-41页 |
| 2.1 实验材料 | 第35-37页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第35-36页 |
| 2.1.2 寡聚核苷酸 | 第36页 |
| 2.1.3 主要酶和化学试剂 | 第36-37页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第37页 |
| 2.2 实验方法 | 第37-41页 |
| 2.2.1 八肋游仆虫的培养及基因组DNA的提取 | 第37页 |
| 2.2.2 八肋游仆虫总RNA的提取及反转录cDNA | 第37页 |
| 2.2.3 EoP0和EoP2全长基因的获得 | 第37-40页 |
| 2.2.4 EoP0和EoP2基因开放阅读框的扩增 | 第40-41页 |
| 2.2.5 序列分析及数据处理 | 第41页 |
| 3 实验结果 | 第41-46页 |
| 3.1 EoP0基因的克隆 | 第41-43页 |
| 3.1.1 EoP0基因的PCR扩增 | 第41-42页 |
| 3.1.2 EoP0基因的序列分析 | 第42-43页 |
| 3.2 EoP2基因的克隆 | 第43-45页 |
| 3.2.1 EoP2基因的PCR扩增 | 第43-44页 |
| 3.2.2 EoP2基因的序列分析 | 第44-45页 |
| 3.3 八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白EoP0、EoP2相似性分析 | 第45-46页 |
| 4 小结 | 第46-49页 |
| 5 讨论 | 第49-52页 |
| 第三章 八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白的纯化及多克隆抗体的制备 | 第52-63页 |
| 1 引言 | 第52页 |
| 2 材料与方法 | 第52-57页 |
| 2.1 实验材料 | 第52-53页 |
| 2.1.1 器材、菌株和质粒 | 第52页 |
| 2.1.2 寡聚核苷酸 | 第52-53页 |
| 2.1.3 主要酶和化学试剂 | 第53页 |
| 2.1.4 主要试剂的配制 | 第53页 |
| 2.2 实验方法 | 第53-55页 |
| 2.2.1 重组质粒pRSETC-EoP0和pRSETC-EoP2的构建 | 第53-54页 |
| 2.2.2 重组蛋白的表达与纯化 | 第54-55页 |
| 2.3 抗原的制备 | 第55-56页 |
| 2.3.1 重组蛋白pRSETC-P2的浓度测定 | 第55页 |
| 2.3.2 小鼠免疫 | 第55-56页 |
| 2.3.3 ELISA检测抗体的效价 | 第56页 |
| 2.4 八肋游仆虫蛋白提取物的免疫印迹 | 第56-57页 |
| 2.4.1 八肋游仆虫总蛋白提取 | 第56-57页 |
| 2.4.2 八肋游仆虫总蛋白提取物的免疫印迹 | 第57页 |
| 3 实验结果 | 第57-60页 |
| 3.1 重组表达质粒pRSETC-EoP0,pRSETC-EoP2的构建 | 第57-58页 |
| 3.2 pRSETC-EoP0,pRSETC-EoP2的表达和纯化 | 第58-59页 |
| 3.3 重组蛋白pRSETC-EoP0,pRSETC-EoP2的Western blotting检测 | 第59-60页 |
| 3.4 抗体制备及滴度测定 | 第60页 |
| 3.5 八肋游仆虫蛋白提取物的免疫印迹 | 第60页 |
| 4 小结 | 第60-61页 |
| 5 讨论 | 第61-63页 |
| 第四章 八肋游仆虫酸性核糖体磷酸化蛋白P2的磷酸化位点分析 | 第63-77页 |
| 1 引言 | 第63页 |
| 2 材料与方法 | 第63-67页 |
| 2.1 实验材料 | 第63-65页 |
| 2.1.1 器材与酶 | 第63页 |
| 2.1.2 质粒 | 第63-64页 |
| 2.1.3 寡聚核苷酸 | 第64页 |
| 2.1.4 主要试剂 | 第64-65页 |
| 2.2 实验方法 | 第65-67页 |
| 2.2.1 定点突变方法 | 第65页 |
| 2.2.2 重组蛋白pRSETC-EoP2以及EoP2突变体的纯化 | 第65页 |
| 2.2.3 重组蛋白pReceiver-CK2α和pReceiver-CK2β的表达与纯化 | 第65-66页 |
| 2.2.4 Pull-down分析CK2α和CK2β间的相互作用 | 第66页 |
| 2.2.5 核磁共振检测EoP2的磷酸化作用 | 第66页 |
| 2.2.6 Phos-tag~(TM)SDS-PAGE磷酸化作用的检测 | 第66-67页 |
| 2.2.7 Native-PAGE检测EoP2的磷酸化作用 | 第67页 |
| 3 实验结果 | 第67-74页 |
| 3.1 EoP2的磷酸化位点的生物信息学分析 | 第67-68页 |
| 3.2 重组质粒的构建 | 第68-69页 |
| 3.3 CK2全酶的表达与纯化 | 第69-70页 |
| 3.4 Pull-down分析CK2α与CK2β之间的相互作用 | 第70-71页 |
| 3.5 Phos-tag~(TM)SDS-PAGE检测EoP2磷酸化作用 | 第71-72页 |
| 3.6 (31)~P-NMR检测EoP2的磷酸化作用位点 | 第72-73页 |
| 3.7 Native-PAGE检测EoP2的磷酸化位点 | 第73-74页 |
| 4 小结 | 第74-75页 |
| 5 讨论 | 第75-77页 |
| 第五章 酸性核糖体磷酸化蛋白P2与延伸因子2之间的相互作用 | 第77-100页 |
| 1 引言 | 第77页 |
| 2 材料与方法 | 第77-80页 |
| 2.1 实验材料 | 第77-78页 |
| 2.1.1 菌株和质粒 | 第77页 |
| 2.1.2 主要酶 | 第77页 |
| 2.1.3 寡聚核苷酸 | 第77-78页 |
| 2.2 实验方法 | 第78-80页 |
| 2.2.1 八肋游仆虫基因组及cDNA的提取见第二章 | 第78页 |
| 2.2.2 八肋游仆虫延伸因子2全长基因的克隆策略 | 第78-79页 |
| 2.2.3 延伸因子2基因开放阅读框的测定 | 第79页 |
| 2.2.4 重组质粒的构建 | 第79-80页 |
| 2.2.5 序列分析及数据处理 | 第80页 |
| 2.2.6 重组质粒EoP2-S21D的构建 | 第80页 |
| 2.2.7 重组蛋白的表达方法见第三章 | 第80页 |
| 2.2.8 Pull-down检测EoP2和EoEF-2蛋白之间的相互作用 | 第80页 |
| 3 实验结果 | 第80-93页 |
| 3.1 八肋游仆虫延伸因子2基因的克隆 | 第80-85页 |
| 3.1.1 八肋游仆虫延伸因子2基因的PCR扩增 | 第80-82页 |
| 3.1.2 八肋游仆虫延伸因子2基因的序列分析 | 第82-85页 |
| 3.2 重组质粒的构建 | 第85-86页 |
| 3.3 Pull-down检测EoP2和EoEF-2之间的相互作用 | 第86-91页 |
| 3.4 重组质粒EoP2-S21D的构建 | 第91页 |
| 3.5 EoP2-S21D与EoEF-2-N之间的相互作用 | 第91-93页 |
| 4 小结 | 第93页 |
| 5 讨论 | 第93-100页 |
| 总结与展望 | 第100-102页 |
| 参考文献 | 第102-111页 |
| 附录1 略语表 | 第111-112页 |
| 附录2 常用试剂配制 | 第112-114页 |
| 附录3 重组表达质粒一览表 | 第114-115页 |
| 附录4 主要仪器设备 | 第115-116页 |
| 攻读学位期间取得的研究成果 | 第116-119页 |
| 致谢 | 第119-121页 |
| 个人简况及联系方式 | 第121-123页 |
