| 摘要 | 第5-7页 |
| ABSTRACT | 第7-8页 |
| 第一章 绪论 | 第12-22页 |
| 1.1 嗜热微生物及极端环境酶 | 第12-14页 |
| 1.1.1 极端环境微生物 | 第12-14页 |
| 1.1.2 极端环境酶 | 第14页 |
| 1.2 内切 1,4-β-甘露糖苷酶 | 第14-18页 |
| 1.2.1 甘露聚糖 | 第14-15页 |
| 1.2.2 糖苷酶 | 第15-16页 |
| 1.2.3 嗜热糖苷酶 | 第16-18页 |
| 1.2.4 内切 1,4-β-甘露糖苷酶 | 第18页 |
| 1.3 大肠杆菌表达系统及融合表达 | 第18-21页 |
| 1.3.1 大肠杆菌基因表达系统 | 第18-19页 |
| 1.3.2 融合表达 | 第19页 |
| 1.3.3 His-Tag融合蛋白 | 第19-21页 |
| 1.4 本课题研究意义及内容 | 第21-22页 |
| 第二章 含有内切 1,4-β-甘露糖苷酶的基因工程菌构建 | 第22-37页 |
| 2.1 实验设备、实验材料和实验试剂 | 第22-25页 |
| 2.1.1 实验主要仪器设备 | 第22-23页 |
| 2.1.2 实验试剂和培养基的配制 | 第23-25页 |
| 2.1.3 菌种、质粒 | 第25页 |
| 2.2 实验原理与方法 | 第25-32页 |
| 2.2.1 海栖热袍菌（Thermotoga maritima）基因组DNA的提取 | 第25-26页 |
| 2.2.2 目标片段的PCR扩增及产物纯化 | 第26-27页 |
| 2.2.3 质粒pMD18T-898257的构建 | 第27-28页 |
| 2.2.4 pMD18T-898257阳性克隆菌落的筛选与鉴定 | 第28-30页 |
| 2.2.5 pET-28a-898257表达载体的构建 | 第30-32页 |
| 2.3 结果与分析 | 第32-36页 |
| 2.3.1 海栖热袍菌基因组DNA提取 | 第32页 |
| 2.3.2 MSB-898257基因的PCR扩增 | 第32-33页 |
| 2.3.3 pMD18T-898257克隆载体的构建 | 第33-34页 |
| 2.3.4 重组pET-28a-898257表达载体的构建 | 第34-35页 |
| 2.3.5 MSB-898257基因片段序列测定 | 第35-36页 |
| 2.4 结论 | 第36-37页 |
| 第三章 目的蛋白的表达、纯化及酶活性检测 | 第37-56页 |
| 3.1 实验设备、实验材料和实验试剂 | 第37-41页 |
| 3.1.1 实验主要仪器设备 | 第37页 |
| 3.1.2 实验试剂和培养基的配制 | 第37-41页 |
| 3.1.3 菌种、质粒 | 第41页 |
| 3.2 实验原理与方法 | 第41-46页 |
| 3.2.1 目的蛋白的表达 | 第41-43页 |
| 3.2.2 目的蛋白的表达条件优化 | 第43页 |
| 3.2.3 利用IPTG诱导表达对宿主菌的影响 | 第43-44页 |
| 3.2.4 目的蛋白的纯化 | 第44页 |
| 3.2.5 考马斯亮蓝法测定蛋白质浓度 | 第44-45页 |
| 3.2.6 蛋白性质分析及酶活性检测 | 第45-46页 |
| 3.3 结果与分析 | 第46-55页 |
| 3.3.1 目的蛋白的表达 | 第46-48页 |
| 3.3.2 目的蛋白的诱导条件优化 | 第48-50页 |
| 3.3.3 利用IPTG诱导表达对宿主菌的影响 | 第50-51页 |
| 3.3.4 目的蛋白纯化 | 第51-52页 |
| 3.3.5 考马斯亮蓝测定蛋白浓度 | 第52页 |
| 3.3.6 目的蛋白性质分析及活性检测 | 第52-55页 |
| 3.4 结论 | 第55-56页 |
| 第四章 工程菌发酵条件优化及应用 | 第56-69页 |
| 4.1 实验设备、实验材料和实验试剂 | 第56-58页 |
| 4.1.1 实验主要仪器设备 | 第56页 |
| 4.1.2 实验试剂和培养基的配制 | 第56-58页 |
| 4.1.3 菌种、亚麻 | 第58页 |
| 4.2 实验方法 | 第58-62页 |
| 4.2.1 菌体的生长曲线 | 第58-59页 |
| 4.2.2 菌体测定方法 | 第59页 |
| 4.2.3 总蛋白测定方法 | 第59页 |
| 4.2.4 表达量测定方法 | 第59页 |
| 4.2.5 影响BL21-898257基因工程菌蛋白产量的因素 | 第59-60页 |
| 4.2.6 BL21-898257基因工程菌发酵条件的优化 | 第60页 |
| 4.2.7 BL21-898257基因工程菌脱胶效果的检测 | 第60-62页 |
| 4.3 结果与分析 | 第62-67页 |
| 4.3.1 BL21-898257生长曲线测定 | 第62页 |
| 4.3.2 影响BL21-898257蛋白表达因素 | 第62-65页 |
| 4.3.3 BL21-898257基因工程菌发酵条件的优化 | 第65-67页 |
| 4.3.4 BL21-898257基因工程菌脱胶效果检测 | 第67页 |
| 4.4 结论 | 第67-69页 |
| 第五章 总结与展望 | 第69-72页 |
| 5.1 总结 | 第69-70页 |
| 5.2 展望 | 第70-72页 |
| 参考文献 | 第72-76页 |
| 攻读学位论文期间研究成果及所获奖项 | 第76-77页 |
| 致谢 | 第77页 |
