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三种不同离子通道神经毒素重组HearNPV病毒毒力差异机理研究

摘要第5-6页
Abstract第6页
第一章 文献综述第9-19页
    1.1 杆状病毒概述第9-11页
        1.1.1 杆状病毒的基本特性第9页
        1.1.2 杆状病毒在昆虫宿主细胞中的复制第9-10页
        1.1.3 杆状病毒部分功能基因的研究进展第10-11页
    1.2 杆状病毒杀虫剂概述第11页
    1.3 重组杆状病毒的基因工程第11-13页
        1.3.1 缺失病毒非必需基因增加杀虫效果第11-12页
        1.3.2 插入外源基因提高杀虫速度第12-13页
        1.3.3 修饰病毒基因拓宽杀虫谱第13页
    1.4 生物毒素第13-16页
        1.4.1 蜘蛛毒素第13-14页
        1.4.2 蝎毒素第14-16页
        1.4.3 疥螨毒素第16页
    1.5 昆虫杆状病毒表达载体系统概述第16-17页
    1.6 研究设想及目的意义第17-19页
第二章 三种毒素基因在昆虫细胞SF9中的表达及活性分析第19-31页
    2.1 实验材料第19页
        2.1.1 试虫、载体、菌株及细胞系第19页
        2.1.2 试验中用到的试剂盒及生化试剂第19页
    2.2 实验方法第19-24页
        2.2.1 引物的设计第19-20页
        2.2.2 将Ar1b、Metx3、RjAa17f基因克隆到载体pFastBac-HTb第20-21页
        2.2.3 重组穿梭载体的构建第21-23页
        2.2.4 Sf9细胞的培养及重组杆状病毒质粒的转染第23页
        2.2.5 BV的大量制备第23页
        2.2.6 蛋白质印迹(Western blot)第23-24页
        2.2.7 三种不同神经毒素基因毒蛋白毒力及中肠电生理测定第24页
    2.3 结果第24-29页
        2.3.1 RjAa17f -T的酶切鉴定及测序分析第24页
        2.3.2 Ar1b-HTb、Metx3-HTb、RjAa17f -HTb的酶切鉴定第24-25页
        2.3.3 转化到DH10Bac菌株并对假阳性进行转座纯化的PCR鉴定第25-26页
        2.3.4 重组杆状病毒Bacmid的转染第26-27页
        2.3.5 蛋白质印迹(Western blot)检测三种神经毒素蛋白的表达第27-28页
        2.3.6 Ar1b、Metx3、RjAa17f毒蛋白毒力测定第28页
        2.3.7 Ar1b、Metx3、RjAa17f毒蛋白对棉铃虫中肠膜电位作用测定结果及分析 . 202.4 结论与讨论第28-29页
    2.4 结论与讨论第29-31页
第三章 两种神经毒素重组病毒致死时间的测定第31-34页
    3.1 实验材料第31-32页
        3.1.1 本实验研究基础第31-32页
    3.2 实验方法第32页
        3.2.1 重组病毒的虫体扩繁与纯化第32页
        3.2.2 RjAa17f-HearNPV、Metx3-HearNPV LT50和LT90的测定第32页
    3.3 结果第32-33页
        3.3.1 RjAa17f-HearNPV、Metx3-HearNPV重组病毒LT50、LT90的测定第32-33页
    3.4 结论与讨论第33-34页
第四章 结论与讨论第34-36页
    4.1 结论第34页
    4.2 讨论第34-36页
参考文献第36-41页
致谢第41-42页
作者简介第42页

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