| 摘要 | 第3-5页 |
| SUMMARY | 第5-6页 |
| 英文缩略 | 第7-12页 |
| 第一篇 文献综述 | 第12-18页 |
| 1 青海血蜱生活史 | 第12页 |
| 2 研究目的和意义 | 第12-16页 |
| 3 研究内容和方法 | 第16-18页 |
| 第二篇 试验部分 | 第18-64页 |
| 第一章 青海血蜱水通道蛋白基因扩增、基因序列多样性及生物信息学分析 | 第18-50页 |
| 1 青海血蜱AQPs部分基因的扩增 | 第18-24页 |
| 1.1 材料 | 第18-19页 |
| 1.1.1 试验动物及蜱 | 第18页 |
| 1.1.2 主要仪器 | 第18-19页 |
| 1.1.3 主要试剂 | 第19页 |
| 1.2 方法 | 第19-24页 |
| 1.2.1 引物的设计与合成 | 第19-20页 |
| 1.2.2 青海血蜱的培养和RNA的提取 | 第20页 |
| 1.2.3 反转录合成第一链cDNA | 第20-21页 |
| 1.2.4 目的基因PCR扩增 | 第21-22页 |
| 1.2.5 PCR产物胶回收 | 第22页 |
| 1.2.6 胶回收产物的连接，转化和测序 | 第22-23页 |
| 1.2.7 序列分析 | 第23-24页 |
| 2 运用SMART RACE法获得青海血蜱AQPs的全长基因序列 | 第24-28页 |
| 2.1 材料 | 第24页 |
| 2.1.1. 试验动物及蜱 | 第24页 |
| 2.1.2 主要仪器 | 第24页 |
| 2.2 方法 | 第24-28页 |
| 2.2.1 青海血蜱的培养和RNA的提取 | 第24页 |
| 2.2.2 引物的设计与合成 | 第24-25页 |
| 2.2.3 运用SMARTer RACE试剂盒合成第一链cDNA | 第25-26页 |
| 2.2.4 5，端和 3，端片段的RACE PCR反应扩增 | 第26-27页 |
| 2.2.5 胶回收产物的连接，转化和测序 | 第27-28页 |
| 2.2.6 序列分析 | 第28页 |
| 3 青海血蜱基因全长序列的验证 | 第28-31页 |
| 3.1 材料 | 第28页 |
| 3.1.1 试验动物及蜱 | 第28页 |
| 3.1.2 主要仪器 | 第28页 |
| 3.2 方法 | 第28-31页 |
| 3.2.1 青海血蜱的培养和RNA的提取 | 第28页 |
| 3.2.2 引物的设计与合成 | 第28-29页 |
| 3.2.3 反转录合成第一链cDNA | 第29页 |
| 3.2.4 目的基因PCR扩增 | 第29-30页 |
| 3.2.5 PCR产物胶回收 | 第30页 |
| 3.2.6 胶回收产物的连接，转化和测序 | 第30-31页 |
| 3.2.7 序列分析 | 第31页 |
| 4 生物多样性及生物信息学分析 | 第31-32页 |
| 4.1 材料 | 第31页 |
| 4.2 方法 | 第31-32页 |
| 5 结果 | 第32-45页 |
| 5.1 青海血蜱AQPs部分基因扩增 | 第32-33页 |
| 5.2 RACE法获得的青海血蜱AQPs全长基因 | 第33-35页 |
| 5.3 青海血蜱AQPs全长基因的验证 | 第35-37页 |
| 5.4 青海血蜱AQPs基因多样性及生物信息学分析 | 第37-45页 |
| 5.4.1 青海血蜱AQPs不同核氨酸序列和氨基酸序列的比对 | 第37-39页 |
| 5.4.2 AQPs基因系统进化分析 | 第39-40页 |
| 5.4.3 青海血蜱AQPs跨膜结构域分析 | 第40-42页 |
| 5.4.4 分子量大小和等电点的预测 | 第42页 |
| 5.4.5 蛋白亲疏水性预测 | 第42页 |
| 5.4.6 AQPs蛋白二级结构预测 | 第42-44页 |
| 5.4.7 AQPs蛋白信号肽预测 | 第44页 |
| 5.4.8 AQPs蛋白功能域的预测 | 第44-45页 |
| 6 讨论 | 第45-50页 |
| 第二章青海血蜱水通道蛋白 (AQPs)抗原获取和抗体制备 | 第50-63页 |
| 1 青海血蜱AQPs的无细胞表达 | 第50-56页 |
| 1.1 材料 | 第50-51页 |
| 1.1.1 仪器设备 | 第50页 |
| 1.1.2 主要试剂耗材 | 第50-51页 |
| 1.1.3 使用到的溶液 | 第51页 |
| 1.2 青海血蜱AQPS蛋白的无细胞表达 | 第51-56页 |
| 1.2.1 引物设计和合成 | 第51-52页 |
| 1.2.2 目的基因PCR的扩增 | 第52页 |
| 1.2.3 PCR产物目的片段胶回收 | 第52-53页 |
| 1.2.4 胶回收产物连接，转化和测序 | 第53页 |
| 1.2.5 质粒提取 | 第53-54页 |
| 1.2.6 表达载体的构建 | 第54-55页 |
| 1.2.7 无细胞小量表达与检测 | 第55页 |
| 1.2.8 无细胞放大表达及检测 | 第55页 |
| 1.2.9 重组蛋白纯化 | 第55-56页 |
| 2 合成多肽及制备多克隆抗体 | 第56页 |
| 3 结果 | 第56-61页 |
| 3.1 青海血蜱AQPs基因的扩增 | 第56-57页 |
| 3.2 重组质粒的双酶切鉴定 | 第57-58页 |
| 3.3 无细胞小量表达SDS-PAGE检测结果分析 | 第58-60页 |
| 3.4 纯化重组蛋白SDS-PAGE检测 | 第60-61页 |
| 4 讨论 | 第61-63页 |
| 第三章 全文结论 | 第63-64页 |
| 参考文献 | 第64-71页 |
| 致谢 | 第71-72页 |
| 作者简介 | 第72-73页 |
| 导师简介 | 第73-74页 |
