噬菌体展示技术筛选与褐飞虱中肠刷状缘膜囊泡结合短肽
| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-9页 |
| 1 前言 | 第9-17页 |
| ·苏云金芽胞杆菌 | 第9-12页 |
| ·苏云金芽胞杆菌概述 | 第9-11页 |
| ·Cry 蛋白的杀虫机制 | 第11-12页 |
| ·噬菌体展示技术 | 第12-13页 |
| ·噬菌体展示技术概述 | 第12页 |
| ·噬菌体展示技术的应用 | 第12-13页 |
| ·绿色荧光蛋白 | 第13-14页 |
| ·绿色荧光蛋白概述 | 第13-14页 |
| ·绿色荧光蛋白的应用 | 第14页 |
| ·稻飞虱的危害与主要防治措施 | 第14-15页 |
| ·本研究的目的及意义 | 第15-17页 |
| 2 材料与方法 | 第17-34页 |
| ·材料 | 第17-20页 |
| ·供试昆虫 | 第17页 |
| ·菌株与载体 | 第17页 |
| ·培养基 | 第17-18页 |
| ·试剂盒与反应体系 | 第18页 |
| ·其他试剂和材料 | 第18-20页 |
| ·方法 | 第20-34页 |
| ·提取刷状缘膜囊泡BBMV | 第20-21页 |
| ·梯度离心中肠匀浆液 | 第20页 |
| ·碱性磷酸酶活性测定 | 第20-21页 |
| ·蛋白浓度测定 | 第21页 |
| ·噬菌体肽库淘选实验 | 第21-25页 |
| ·噬菌体滴度测定 | 第21-22页 |
| ·淘选程序 | 第22-24页 |
| ·提取单克隆噬菌体DNA | 第24-25页 |
| ·噬菌体DNA 测序 | 第25页 |
| ·构建克隆载体 | 第25-29页 |
| ·设计引物 | 第25-26页 |
| ·PCR 反应 | 第26-27页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第27页 |
| ·PCR 产物回收 | 第27页 |
| ·连接克隆载体 | 第27-28页 |
| ·转化JM109 | 第28页 |
| ·提取重组质粒 | 第28页 |
| ·单双酶切验证 | 第28-29页 |
| ·测序验证 | 第29页 |
| ·构建表达载体 | 第29-31页 |
| ·双酶切重组质粒 | 第29-30页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第30页 |
| ·切胶回收 | 第30页 |
| ·连接表达载体 | 第30页 |
| ·转化BL21 | 第30-31页 |
| ·提取重组质粒 | 第31页 |
| ·单双酶切验证 | 第31页 |
| ·诱导表达 | 第31页 |
| ·蛋白提纯 | 第31-32页 |
| ·SDS-PAGE 验证 | 第32页 |
| ·膜饲法观察结合情况 | 第32-34页 |
| 3 结果和分析 | 第34-42页 |
| ·BBMV 提取结果 | 第34页 |
| ·噬菌体肽库淘选结果 | 第34-36页 |
| ·克隆结果 | 第36-39页 |
| ·PCR 反应结果 | 第36-37页 |
| ·单双酶切验证结果 | 第37-39页 |
| ·融合蛋白诱导和提纯结果 | 第39-41页 |
| ·融合蛋白与中肠结合情况 | 第41-42页 |
| 4 讨论 | 第42-43页 |
| 参考文献 | 第43-47页 |
| 致谢 | 第47页 |
