| 摘要 | 第3-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 前言 | 第11-15页 |
| 技术路线图 | 第15-16页 |
| 第一章 明确Talin1在肝癌中的表达情况及临床意义 | 第16-35页 |
| 第一节 实验材料、试剂和主要设备 | 第16-20页 |
| 一、肝癌病程芯片、肝癌样本及其临床资料 | 第16-19页 |
| 二、主要试剂的配制 | 第19页 |
| 三、主要仪器 | 第19-20页 |
| 第二节 实验方法 | 第20-26页 |
| 一、组织RNA提取、逆转录、qRT-PCR | 第20-23页 |
| 二、通过Western blot检测蛋白的表达 | 第23-24页 |
| 三、免疫组织化学技术检测肝癌病程芯片及石蜡切片中Talin1的表达情况 | 第24-25页 |
| 四、数据分析及统计学方法 | 第25-26页 |
| 第三节 结果 | 第26-32页 |
| 一、qRT-PCR及western blot检测36对配对的癌旁组织及肝癌组织中Talin1表达 | 第26-27页 |
| 二、免疫组织化学技术检测Talin1在肝癌病程芯片中的表达情况 | 第27-28页 |
| 三、200例肝细胞性肝癌石蜡切片中Talin1的表达情况 | 第28页 |
| 四、Talin1的表达水平与肝癌患者的临床病理特征之间的相关性 | 第28-30页 |
| 五、Talin1的表达水平可作为肝癌患者预后的独立危险因素 | 第30-31页 |
| 六、Talin1的表达水平与肝癌患者生存率之间的关系 | 第31-32页 |
| 第四节 讨论 | 第32-35页 |
| 第二章 探讨Talin1在肝癌中的生物学功能 | 第35-50页 |
| 第一节 实验材料、试剂和主要设备 | 第35-36页 |
| 一、肝癌细胞株 | 第35页 |
| 二、主要试剂 | 第35-36页 |
| 三、主要器材 | 第36页 |
| 第二节 实验方法 | 第36-42页 |
| 一、肝癌细胞复苏、培养与冻存 | 第36-38页 |
| 二、RNA提取、逆转录及qRT-PCR | 第38页 |
| 三、Western blot检测蛋白表达 | 第38页 |
| 四、Talin1干扰序列的合成 | 第38-39页 |
| 五、Talin1-siRNA瞬时转染 | 第39页 |
| 六、transwell实验检测肝癌细胞迁移及侵袭能力 | 第39-40页 |
| 七、CCK-8增殖实验 | 第40页 |
| 八、EdU增殖实验 | 第40-41页 |
| 九、免疫荧光实验及FITC-鬼笔环肽染色 | 第41页 |
| 十、数据分析及统计学方法 | 第41-42页 |
| 第三节 结果 | 第42-49页 |
| 一、抑制Talin1促进肝癌细胞的上皮间质转化、迁移及侵袭 | 第42-47页 |
| 二、抑制Talin1的表达减弱肝癌细胞的增殖能力 | 第47-49页 |
| 第四节 讨论 | 第49-50页 |
| 第三章 探讨低表达的Talin1在促进肝癌细胞上皮间质转换、迁移及侵袭的分子机制 | 第50-61页 |
| 第一节 实验材料、试剂和主要设备 | 第50-52页 |
| 一、肝癌细胞株 | 第50页 |
| 二、主要试剂 | 第50-52页 |
| 三、主要器材 | 第52页 |
| 第二节 实验方法 | 第52-53页 |
| 一、Western blot实验分析相关信号通路蛋白的表达 | 第52页 |
| 二、信号通路阻断实验 | 第52-53页 |
| 三、Transwell实验检测迁移及侵袭能力 | 第53页 |
| 四、统计学方法 | 第53页 |
| 第三节 结果 | 第53-59页 |
| 一、抑制Talin1的表达促进肝癌细胞中ERK1/2信号通路的激活 | 第53-55页 |
| 二、ERK1/2抑制剂U0126能逆转Talin1的干扰对肝癌细胞上皮间质转换的促进作用 | 第55-57页 |
| 三、ERK1/2抑制剂U0126能逆转Talin1的干扰对肝癌细胞迁移及侵袭的促进作用 | 第57-59页 |
| 第四节 讨论 | 第59-61页 |
| 全文讨论 | 第61-66页 |
| 全文小结 | 第66-68页 |
| 参考文献 | 第68-77页 |
| 攻读硕士期间研究成果 | 第77-78页 |
| 缩略语中英文对照 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
