| 摘要 | 第9-12页 |
| ABSTRACT | 第12-15页 |
| 缩略语 | 第16-17页 |
| 前言 | 第17-19页 |
| 第一篇 文献综述 | 第19-39页 |
| 第一章 布氏杆菌病的病原学与致病机制研究进展 | 第19-29页 |
| 1.1 布氏杆菌病的起源及病原 | 第19-21页 |
| 1.2 布氏杆菌的危害 | 第21-22页 |
| 1.3 布氏杆菌的致病毒力因子 | 第22-29页 |
| 1.3.1 脂多糖 | 第23页 |
| 1.3.2 BvrR-BvrS双组分系统 | 第23-24页 |
| 1.3.3 密度传感系统(QS) | 第24页 |
| 1.3.4 应激反应蛋白 | 第24-26页 |
| 1.3.5 四型分泌系统 | 第26-29页 |
| 第二章 sRNA的识别鉴定及功能研究 | 第29-39页 |
| 1.1 sRNA的识别鉴定 | 第29-31页 |
| 1.1.1 生物信息学方法 | 第29-30页 |
| 1.1.2 试验方法学 | 第30-31页 |
| 1.2 sRNA的功能研究 | 第31-39页 |
| 1.2.1 sRNA的分类及作用机制 | 第32-34页 |
| 1.2.2 蛋白Hfq对sRNA调控的协同作用 | 第34-35页 |
| 1.2.3 sRNA的功能 | 第35-39页 |
| 第二篇 试验研究 | 第39-101页 |
| 第三章 布氏杆菌sRNA—BSR1141的预测及鉴定 | 第39-55页 |
| 1 材料与方法 | 第39-45页 |
| 1.1 试验试剂 | 第39页 |
| 1.2 试验仪器 | 第39-40页 |
| 1.3 引物 | 第40页 |
| 1.4 布氏杆菌sRNA(BSR1141)的生物信息学预测 | 第40页 |
| 1.5 sRNA—BSR1141的RT-PCR验证 | 第40-41页 |
| 1.6 sRNA—BSR1141的Northern试验 | 第41-43页 |
| 1.7 BSR1141转录方向分析试验 | 第43页 |
| 1.8 5'和3'RACE试验 | 第43-44页 |
| 1.9 BSR1141在体外条件下的qRT-PCR试验 | 第44页 |
| 1.10 BSR1141在体内条件下的qRT-PCR试验 | 第44-45页 |
| 2 结果与分析 | 第45-50页 |
| 2.1 BSR1141的生物信息学总述 | 第45-46页 |
| 2.2 sRNA—BSR1141保守性分析 | 第46页 |
| 2.3 BSR1141在不同生长时期的表达 | 第46-47页 |
| 2.4 BSR1141转录方向的验证 | 第47页 |
| 2.5 BSR1141的转录起点和转录终点 | 第47-48页 |
| 2.6 BSR1141的全序列及二级结构 | 第48-49页 |
| 2.7 BSR1141的表达受环境刺激的影响 | 第49页 |
| 2.8 BSR1141的表达与布氏杆菌感染进程有关 | 第49-50页 |
| 2.9 BSR1141的表达依赖于分子伴侣蛋白Hfq | 第50页 |
| 3 讨论 | 第50-55页 |
| 第四章 布氏杆菌BSR1141突变株的构建及表型试验 | 第55-66页 |
| 1 材料与方法 | 第55-58页 |
| 1.1 菌株、培养基及试验动物 | 第55页 |
| 1.2 主要试剂及仪器 | 第55-56页 |
| 1.3 引物单 | 第56页 |
| 1.4 BSR1141突变株的构建 | 第56-57页 |
| 1.5 BSR1141互补株的构建 | 第57页 |
| 1.6 BSR1141突变株和互补株的RT-PCR验证 | 第57页 |
| 1.7 16M、16M△BSR1141和16M-BSR1141的体外刺激试验 | 第57-58页 |
| 1.8 16M、16M△BSR1141和16M-BSR1141的生长曲线 | 第58页 |
| 1.9 16M、16M△BSR1141和16M-BSR1141小鼠毒力生存竞争试验 | 第58页 |
| 2 结果与分析 | 第58-63页 |
| 2.1 BSR1141突变株的构建 | 第58-59页 |
| 2.2 BSR1141互补株的构建 | 第59-60页 |
| 2.3 BSR1141突变株和互补株的RT-PCR验证 | 第60-61页 |
| 2.4 BSR1141影响布氏杆菌的生长速度 | 第61页 |
| 2.5 BSR1141影响布氏杆菌对模拟巨噬细胞内环境的适应力 | 第61-62页 |
| 2.6 BSR1141影响布氏杆菌在小鼠脾脏中的生存能力 | 第62-63页 |
| 3 讨论 | 第63-66页 |
| 第五章 BSR1141通过靶标基因来介导布氏杆菌毒力及在宿主胞内生存能力 | 第66-89页 |
| 1 材料与方法 | 第66-74页 |
| 1.1 主要生化试剂 | 第66-67页 |
| 1.2 Western Blotting相关试剂 | 第67页 |
| 1.3 主要仪器 | 第67-68页 |
| 1.4 引物单 | 第68-70页 |
| 1.5 BSR1141靶标基因的生物信息学预测 | 第70页 |
| 1.6 靶标基因在16M、16M△BSR1141和16M-BSR1141中RT-PCR验证 | 第70页 |
| 1.7 mRNA(virB2、GntR和tetR)-GFP融合表达系统试验 | 第70-74页 |
| 1.8 BSR1141-mRNA相互作用与Hfq的相关性试验 | 第74页 |
| 1.9 T4SS在16M、16M?BSR1141和16M-BSR1141中的qRT-PCR试验 | 第74页 |
| 2 结果与分析 | 第74-84页 |
| 2.1 BSR1141的靶标基因分析 | 第74-76页 |
| 2.2 BSR1141调控靶标基因的转录水平 | 第76-77页 |
| 2.3 BSR1141-mRNA结合位点分析 | 第77-78页 |
| 2.4 pZE-BSR1141的构建 | 第78-79页 |
| 2.5 mRNA-GFP重组质粒的构建 | 第79-81页 |
| 2.6 BSR1141直接调控靶标基因virB2、gntR和tetR的表达 | 第81-82页 |
| 2.7 蛋白Hfq促进BSR1141-mRNA间的相互作用 | 第82-83页 |
| 2.8 BSR1141下调T4SS的整体转录水平 | 第83-84页 |
| 3 讨论 | 第84-89页 |
| 第六章 sRNA(BSR0602和BSR1141)通过双向调控sodA的表达介导内源性氧代谢 | 第89-101页 |
| 1 材料与方法 | 第89-92页 |
| 1.1 菌株、质粒和培养基 | 第89页 |
| 1.2 主要试剂 | 第89-90页 |
| 1.3 引物 | 第90页 |
| 1.4 16M和16M-BSR0602的双向电泳 | 第90-91页 |
| 1.5 RT-PCR试验 | 第91页 |
| 1.6 sodA标记株的构建 | 第91-92页 |
| 1.7 sodA蛋白的免疫印迹 | 第92页 |
| 1.8 H_2O_2敏感性试验 | 第92页 |
| 2 结果与分析 | 第92-98页 |
| 2.1 BSR0602过表达后sodA的表达变化 | 第92-95页 |
| 2.2 BSR0602和BSR1141对SodA转录水平的调控作用 | 第95-96页 |
| 2.3 BSR0602和BSR1141对SodA蛋白水平的调控作用 | 第96-97页 |
| 2.4 BSR0602和BSR1141对氧压的敏感性 | 第97-98页 |
| 3 讨论 | 第98-101页 |
| 全文小结 | 第101-103页 |
| 致谢 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-112页 |
