| 摘要 | 第7-9页 |
| ABSTRACT | 第9-10页 |
| 缩略词 | 第11-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-31页 |
| 1.1 植物果聚糖介绍 | 第13-16页 |
| 1.1.1 植物果聚糖的分布及种类 | 第13-15页 |
| 1.1.2 果聚糖在人类生活中的应用 | 第15-16页 |
| 1.2 植物果聚糖代谢及分子生物学研究进展 | 第16-23页 |
| 1.2.1 果聚糖的合成代谢及相关酶的克隆与功能研究进展 | 第16-18页 |
| 1.2.2 果聚糖的降解代谢及相关酶的克隆与功能研究进展 | 第18-21页 |
| 1.2.3 果聚糖代谢酶的氨基酸序列分析 | 第21-23页 |
| 1.3 果聚糖代谢调控与植物抗逆性 | 第23-26页 |
| 1.3.1 果聚糖在抗旱和抗寒中的作用 | 第23-24页 |
| 1.3.2 果聚糖在耐盐和耐缺氧等中的功能 | 第24-25页 |
| 1.3.3 植物果聚糖的抗逆机理 | 第25-26页 |
| 1.4 巴斯德毕赤酵母表达系统 | 第26-27页 |
| 1.5 毕赤酵母重组FEH的酶学性质研究进展 | 第27-29页 |
| 1.5.1 重组FEH酶的蛋白分子量 | 第27-28页 |
| 1.5.2 重组FEH酶的底物特异性及最适反应pH和温度 | 第28-29页 |
| 1.6 本论文的研究意义、内容及技术路线 | 第29-31页 |
| 1.6.1 本论文的研究意义 | 第29页 |
| 1.6.2 本论文的研究内容及技术路线 | 第29-31页 |
| 第二章 菊芋果聚糖外切水解酶基因(Ht1-FEHs)的克隆及其生物信息学分析 | 第31-45页 |
| 2.1 材料与方法 | 第31-35页 |
| 2.1.1 植物材料 | 第31-32页 |
| 2.1.2 菌株及克隆载体 | 第32页 |
| 2.1.3 总RNA的提取与cDNA的合成 | 第32页 |
| 2.1.4 培养基和试剂 | 第32页 |
| 2.1.5 序列拼接与引物设计 | 第32页 |
| 2.1.6 PCR扩增及PCR产物测序 | 第32-34页 |
| 2.1.7 基因序列的生物信息学分析 | 第34-35页 |
| 2.2 结果与分析 | 第35-42页 |
| 2.2.1 菊芋1-FEH基因的克隆及命名 | 第35-36页 |
| 2.2.2 系统发育进化树分析 | 第36-38页 |
| 2.2.3 氨基酸保守结构域分析 | 第38-40页 |
| 2.2.4 氨基酸序列的信号肽分析 | 第40-41页 |
| 2.2.5 氨基酸序列的糖基化位点分析 | 第41-42页 |
| 2.2.6 菊芋1-FEHs的分子量大小和等电点预测 | 第42页 |
| 2.3 讨论 | 第42-45页 |
| 第三章 菊芋果聚糖外切水解酶基因(Ht1-FEHs)的表达及酶学性质的研究 | 第45-67页 |
| 3.1 材料与方法 | 第45-56页 |
| 3.1.1 质粒与菌株 | 第45-46页 |
| 3.1.2 培养基及缓冲溶液 | 第46页 |
| 3.1.3 含目的基因表达载体的构建 | 第46-50页 |
| 3.1.4 表达载体转化毕赤酵母 | 第50-53页 |
| 3.1.5 菊芋Ht1-FEHⅠ/Ⅱ基因在毕赤酵母中的诱导表达 | 第53-54页 |
| 3.1.6 重组蛋白的纯化 | 第54-55页 |
| 3.1.7 可溶性蛋白含量的测定 | 第55页 |
| 3.1.8 重组蛋白的SDS-PAGE与LC-MS/MS分析 | 第55页 |
| 3.1.9 纯化的重组蛋白的酶学性质分析 | 第55-56页 |
| 3.2 结果与分析 | 第56-64页 |
| 3.2.1 表达载体的构建及测序分析 | 第56-57页 |
| 3.2.2 毕赤酵母的转化与阳性转化子的鉴定 | 第57-58页 |
| 3.2.3 重组蛋白的诱导表达及粗酶液酶活测定 | 第58-59页 |
| 3.2.4 重组蛋白的SDS-PAGE和LC-MS/MS分析 | 第59-62页 |
| 3.2.5 纯化的重组酶Ht1-FEHs的酶学性质分析 | 第62-64页 |
| 3.3 讨论 | 第64-67页 |
| 第四章 菊芋果聚糖水解酶基因(Ht1-FEHs)的表达模式分析及其功能鉴定 | 第67-81页 |
| 4.1 材料与方法 | 第67-71页 |
| 4.1.1 植物材料与生长条件 | 第67-68页 |
| 4.1.2 总RNA的提取及cDNA的制备 | 第68页 |
| 4.1.3 相对实时定量表达及数据分析 | 第68-70页 |
| 4.1.4 菊芋块茎萌发期块茎中总蛋白酶液的提取及果聚糖代谢酶的酶活变化测定 | 第70页 |
| 4.1.5 菊芋块茎萌发期块茎中糖分含量的测定 | 第70-71页 |
| 4.1.6 数据统计及分析 | 第71页 |
| 4.2 结果与分析 | 第71-77页 |
| 4.2.1 菊芋Ht1-FEHs在全生育期各组织中的表达分析 | 第71-72页 |
| 4.2.2 菊芋Ht1-FEHs在逆境胁迫下的定量表达分析 | 第72-74页 |
| 4.2.3 块茎萌发期在逆境胁迫条件下的块茎中的果聚糖代谢酶的酶活变化 | 第74-76页 |
| 4.2.4 块茎萌发期在逆境胁迫条件下的块茎中的糖分含量的变化 | 第76-77页 |
| 4.3 讨论 | 第77-81页 |
| 4.3.1 菊芋Ht1-FEHs在全生育期各组织中的表达分析 | 第77页 |
| 4.3.2 菊芋Ht1-FEHs在逆境胁迫下的定量表达分析 | 第77-78页 |
| 4.3.3 块茎萌发期在逆境胁迫条件下的块茎中的果聚糖代谢酶的酶活变化和糖分变化 | 第78-81页 |
| 全文总结 | 第81-83页 |
| 创新点 | 第83-85页 |
| 展望 | 第85-87页 |
| 攻读硕士学位期间发表或待发表的论文 | 第87-89页 |
| 参考文献 | 第89-107页 |
| 附录 | 第107-114页 |
| 致谢 | 第114页 |
