| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 文献综述 | 第10-19页 |
| ·苹果芽变育种的研究进展 | 第10-12页 |
| ·苹果芽变育种的现状 | 第10页 |
| ·苹果芽变育种的研究意义 | 第10-11页 |
| ·苹果芽变的研究方法 | 第11-12页 |
| ·苹果芽变机理的研究 | 第12页 |
| ·逆转座子的研究进展 | 第12-15页 |
| ·转座子的来源和分类 | 第12-13页 |
| ·逆转座子的类型和结构 | 第13-14页 |
| ·植物逆转座子特性 | 第14-15页 |
| ·反向PCR | 第15-16页 |
| ·热不对称交错PCR | 第16-17页 |
| ·高效热不对称交错PCR | 第17-18页 |
| ·展望 | 第18-19页 |
| 2 引言 | 第19-21页 |
| ·研究目的和意义 | 第19页 |
| ·研究内容 | 第19-21页 |
| ·分离atr1逆转座子全长 | 第19-20页 |
| ·苹果“元帅”系短枝变异品种中特异位点的分离 | 第20-21页 |
| 3 材料与方法 | 第21-28页 |
| ·材料 | 第21页 |
| ·试验方法 | 第21-28页 |
| ·叶片基因组DNA的提取 | 第21页 |
| ·DNA的检测与定量 | 第21-22页 |
| ·目的产物的回收与纯化 | 第22页 |
| ·回收产物与克隆载体连接 | 第22页 |
| ·连接产物的转化 | 第22页 |
| ·单菌落挑菌和目的条带检测 | 第22页 |
| ·逆转座子全长的分离 | 第22-24页 |
| ·根据Ty1-copia类逆转座子结构特征巧妙设计引物,得到逆转座子剩余序列 | 第22页 |
| ·反向PCR扩增逆转座子5'LTR剩余序列 | 第22-23页 |
| ·目的条带的验证 | 第23页 |
| ·设计引物验证逆转座子全长 | 第23-24页 |
| ·基于atr1-LTR的“元帅”系短枝变异品种中特异性位点的分离 | 第24-28页 |
| ·利用Tail-PCR扩增特异片段1722bp的5'端的旁侧序列 | 第24-25页 |
| ·验证拼接结果 | 第25页 |
| ·利用苹果基因组扩增1722bp的3'端侧翼序列 | 第25页 |
| ·利用HiTAIL-PCR扩增1722bp的3'端侧翼序列 | 第25-26页 |
| ·拼接序列的验证 | 第26页 |
| ·利用反向PCR继续扩增序列的5'端 | 第26-27页 |
| ·上述拼接序列的验证 | 第27-28页 |
| 4 结果与分析 | 第28-46页 |
| ·苹果叶片基因组DNA提取结果的检测 | 第28页 |
| ·逆转座子全长的分离 | 第28-38页 |
| ·逆转座子酶区和5'LTR部分序列的分离 | 第28-29页 |
| ·反向PCR扩增逆转座子5'LTR剩余序列 | 第29-30页 |
| ·目的条带的验证 | 第30页 |
| ·验证逆转座子全长 | 第30-38页 |
| ·基于atr1-LTR的“元帅”系短枝变异品种中特异性位点的分离 | 第38-46页 |
| ·Tail-PCR扩增特异片段1722bp的5'端的旁侧序列 | 第38-39页 |
| ·验证拼接结果 | 第39页 |
| ·利用苹果基因组扩增1722bp的3'端侧翼序列 | 第39-40页 |
| ·利用hiTAIL-PCR扩增1722bp的3'端侧翼序列 | 第40-41页 |
| ·验证3066bp | 第41-42页 |
| ·利用反向PCR继续扩增序列的5'端 | 第42页 |
| ·验证4345bp | 第42-46页 |
| 5 讨论 | 第46-48页 |
| ·三种染色体步移方法的应用潜力及待改进的问题 | 第46页 |
| ·逆转座子atr1及短枝变异品种中特异位点序列在苹果基因组中的存在 | 第46-48页 |
| 6 结论 | 第48-49页 |
| 参考文献 | 第49-54页 |
| 致谢 | 第54-55页 |
| 作者简介 | 第55页 |
