| 摘要 | 第1-3页 |
| Abstract | 第3-7页 |
| 前言 | 第7-18页 |
| 1 细菌的群体感应系统 | 第7-10页 |
| 2 群体感应系统中的AHL信号分子 | 第10-12页 |
| 3 群体感应系统中AHL降解酶研究进展 | 第12-15页 |
| ·AHL内酯酶 | 第13-14页 |
| ·AHL酰胺酶 | 第14-15页 |
| 4 蛋白晶体生长相关原理 | 第15-17页 |
| 5 本研究的目的与意义 | 第17-18页 |
| 材料与方法 | 第18-33页 |
| 1 菌株和质粒 | 第18页 |
| 2 培养基与缓冲液配制 | 第18-19页 |
| 3 主要试剂 | 第19-21页 |
| ·分子生物学相关试剂 | 第19页 |
| ·蛋白表达与纯化相关试剂 | 第19-20页 |
| ·晶体生长相关试剂 | 第20-21页 |
| ·主要实验耗材 | 第21页 |
| 4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 5 AidE蛋白的表达 | 第22-31页 |
| ·AidE表达质粒的构建 | 第22-26页 |
| ·PCR扩增 | 第23-24页 |
| ·酶切 | 第24-25页 |
| ·连接 | 第25页 |
| ·连接产物转化Trans10菌株 | 第25页 |
| ·提取质粒及菌液测序 | 第25页 |
| ·重组质粒转化BL21菌株 | 第25-26页 |
| ·保存AidE菌株 | 第26页 |
| ·AidE蛋白的诱导表达 | 第26页 |
| ·AidE蛋白的纯化 | 第26-29页 |
| ·破菌 | 第26页 |
| ·Ni柱亲和层析纯化 | 第26-27页 |
| ·分子筛纯化 | 第27-28页 |
| ·电泳 | 第28-29页 |
| ·硒代AidE蛋白的纯化 | 第29-31页 |
| 6 AidE的底物特异性研究 | 第31页 |
| 7 AidE母体及硒代蛋白晶体生长 | 第31-33页 |
| ·玻片的硅化 | 第31页 |
| ·AidE母体晶体生长 | 第31-32页 |
| ·AidE蛋白晶体生长条件的初筛 | 第31-32页 |
| ·AidE蛋白晶体生长条件的优化 | 第32页 |
| ·硒代AidE蛋白的晶体生长 | 第32页 |
| ·AidE的初步晶体学数据 | 第32-33页 |
| 结果与分析 | 第33-53页 |
| 1 AidE重组蛋白的载体构建及序列分析 | 第33-36页 |
| ·AidE重组蛋白的载体构建 | 第33页 |
| ·AidE重组蛋白的序列分析 | 第33-35页 |
| ·AidE的系统发育树构建 | 第35-36页 |
| 2 AidE的表达与纯化 | 第36-37页 |
| ·Ni柱亲和层析纯化 | 第36-37页 |
| ·凝胶过滤层析纯化 | 第37页 |
| 3 硒代AidE蛋白的表达与纯化 | 第37-42页 |
| ·Ni柱亲和层析纯化 | 第37-38页 |
| ·凝胶过滤层析和QFF离子交换层析 | 第38-42页 |
| ·分子筛后QFF纯化蛋白样品的制备 | 第38-40页 |
| ·QFF后分子筛纯化蛋白样品的制备 | 第40-42页 |
| 4 AidE功能研究 | 第42-44页 |
| 5 AidE及硒代AidE蛋白晶体的生长 | 第44-47页 |
| ·AidE蛋白晶体的生长 | 第44-46页 |
| ·硒代AidE蛋白晶体的生长 | 第46-47页 |
| 6 AidE晶体衍射数据的收集及初步晶体学数据的统计 | 第47-53页 |
| 讨论 | 第53-56页 |
| 1 重组蛋白的表达与纯化 | 第53页 |
| 2 AidE的功能分析 | 第53-54页 |
| 3 AidE蛋白与硒代AidE蛋白的结晶 | 第54-56页 |
| 参考文献 | 第56-62页 |
| 致谢 | 第62-63页 |
| 攻读硕士学位期间发表论文 | 第63-64页 |