| 中文摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-19页 |
| 第一章 引言 | 第19-36页 |
| ·癌症的形成 | 第19-20页 |
| ·胃癌的研究现状 | 第20-21页 |
| ·肝癌的研究现状 | 第21-22页 |
| ·指数富集配体系统进化(SELEX)技术 | 第22-26页 |
| ·SELEX技术的基本原理与流程 | 第22-23页 |
| ·SELEX筛选技术的特点 | 第23-25页 |
| ·SELEX技术的应用 | 第25-26页 |
| ·SELEX技术在基础研究方面的应用 | 第25页 |
| ·SELEX技术在临床方面的应用 | 第25-26页 |
| ·SELEX技术在药物筛选方面的应用 | 第26页 |
| ·适配子(aptamer) | 第26-30页 |
| ·适配子的定义 | 第26-27页 |
| ·细胞筛选技术(cell-SELEX) | 第27-28页 |
| ·cell-SELEX技术的临床应用 | 第28-29页 |
| ·肿瘤特异性地诊断 | 第28-29页 |
| ·靶向性地治疗肿瘤 | 第29页 |
| ·肿瘤标志物的筛选 | 第29页 |
| ·适配子的改造 | 第29-30页 |
| ·适配子筛选中常用的分离方法 | 第30-32页 |
| ·毛细管电泳(CE-SELEX) | 第30页 |
| ·磁珠和亲和色谱 | 第30-31页 |
| ·纤维素膜分离 | 第31页 |
| ·微流控用于SELEX筛选 | 第31-32页 |
| ·SELEX筛选中使用的其它方法 | 第32页 |
| ·CELL-SELEX筛选中常用的分析及检测手段 | 第32-35页 |
| ·激光共聚焦显微镜 | 第32-33页 |
| ·流式细胞术 | 第33页 |
| ·免疫组化与免疫荧光 | 第33-35页 |
| ·本研究的临床意义 | 第35-36页 |
| 第二章 SELEX筛选的PCR条件优化 | 第36-44页 |
| ·材料与方法 | 第36-40页 |
| ·实验试剂 | 第36页 |
| ·实验材料 | 第36页 |
| ·主要溶液的配制 | 第36-37页 |
| ·实验仪器 | 第37-38页 |
| ·实验方法 | 第38-40页 |
| ·引物设计的原则 | 第38页 |
| ·凝胶电泳和EB染色 | 第38-39页 |
| ·优化对称PCR扩增的条件 | 第39页 |
| ·不对称PCR扩增条件优化 | 第39-40页 |
| ·结果 | 第40-42页 |
| ·对称PCR扩增的优化结果 | 第40-41页 |
| ·不对称PCR扩增优化的结果 | 第41-42页 |
| ·讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 胃癌细胞适配子的筛选 | 第44-66页 |
| ·材料与方法 | 第44-45页 |
| ·实验试剂与材料 | 第44页 |
| ·主要溶液的配制 | 第44-45页 |
| ·主要的仪器 | 第45页 |
| ·实验方法 | 第45-46页 |
| ·细胞培养 | 第45-46页 |
| ·复苏细胞 | 第45-46页 |
| ·细胞传代 | 第46页 |
| ·冻存 | 第46页 |
| ·胃癌细胞适配子筛选 | 第46-51页 |
| ·适配子筛选条件的优化 | 第46页 |
| ·SGC7901胃癌细胞筛选 | 第46-51页 |
| ·准备SGC7901胃癌细胞 | 第46页 |
| ·文库的准备 | 第46-47页 |
| ·结合反应 | 第47页 |
| ·细胞收集与洗涤 | 第47页 |
| ·收集结合的文库及文库的定量 | 第47页 |
| ·反筛过程的加入 | 第47页 |
| ·纯化结合的ssDNA | 第47-48页 |
| ·对称PCR扩增结合ssDNA | 第48页 |
| ·dsDNA回收及定量 | 第48-49页 |
| ·不对称PCR扩增ssDNA | 第49页 |
| ·纯化ssDNA | 第49-50页 |
| ·用人的胃黏膜细胞GES-1细胞进行反筛 | 第50页 |
| ·流式细胞术实验和共聚焦显微镜监测文库的富集 | 第50页 |
| ·用碱性磷酸酶反应试剂盒检测文库与SGC7901胃癌细胞的亲和力 | 第50-51页 |
| ·克隆测序及二级结构分析 | 第51-53页 |
| ·对称PCR扩增 | 第51页 |
| ·用T-A试剂盒连pUC-T载体 | 第51-52页 |
| ·PCR产物与质粒连接 | 第51-52页 |
| ·连接产物的转化 | 第52页 |
| ·连接产物的鉴定 | 第52页 |
| ·挑取克隆及质粒扩增 | 第52-53页 |
| ·流式细胞术实验确定克隆的结合力 | 第53页 |
| ·克隆及测序 | 第53页 |
| ·结果与讨论 | 第53-66页 |
| ·适配子筛选条件的优化结果 | 第53-54页 |
| ·荧光标记的文库的扩增 | 第54-55页 |
| ·流式细胞术实验监测文库的富集 | 第55-57页 |
| ·共聚焦实验监测文库的富集 | 第57-59页 |
| ·Digxon-标记的文库的扩增 | 第59页 |
| ·碱性磷酸酶测定文库与SGC7901细胞的结合力 | 第59-60页 |
| ·克隆及测序 | 第60-66页 |
| ·PCR鉴定克隆 | 第60-61页 |
| ·流式细胞术实验测定单克隆与靶细胞的结合力 | 第61页 |
| ·测序 | 第61-62页 |
| ·适配子的二级结构分析 | 第62-66页 |
| 第四章 胃癌细胞单一适配子的特异性鉴定 | 第66-77页 |
| ·细胞培养 | 第66页 |
| ·截短适配子的序列及二级结构 | 第66-71页 |
| ·截短适配子的序列 | 第66-67页 |
| ·截短适配子的二级结构 | 第67-70页 |
| ·截短适配子的亲和力测定 | 第70-71页 |
| ·截短适配子的特异性分析 | 第71页 |
| ·结果与讨论 | 第71-76页 |
| ·截短适配子的亲和力 | 第71-73页 |
| ·截短适配子的特异性分析 | 第73-76页 |
| ·流式细胞术分析适配子的特异性 | 第73-74页 |
| ·共聚焦实验分析适配子的特异性 | 第74-76页 |
| ·本章讨论 | 第76-77页 |
| 第五章 胃癌适配子临床应用的初步研究 | 第77-95页 |
| ·引言 | 第77-80页 |
| ·适配子用于传感器(aptasensor) | 第77-80页 |
| ·电化学适配子传感器(Electrochemical Aptasensor) | 第78页 |
| ·荧光光学适配子传感器(Fluorescence-Based Optical Aptasensor) | 第78-79页 |
| ·适配子比色法光学传感器(Colorimetric-Based Optical Aptasensor) | 第79页 |
| ·其它的适配子传感器 | 第79-80页 |
| ·适配子在临床上的的应用 | 第80-82页 |
| ·治疗疾病 | 第80页 |
| ·药物运输系统 | 第80-81页 |
| ·生物成像 | 第81-82页 |
| ·胃癌适配子的临床应用之一—组织实验 | 第82页 |
| ·组织准备 | 第82页 |
| ·免疫组化实验 | 第82页 |
| ·胃癌适配子的临床应用之二—肿瘤细胞的俘获与释放 | 第82-83页 |
| ·构建适配子-量子点磁纳米微球(FMNS)的检测平台 | 第82-83页 |
| ·适配子-量子点磁纳米微球俘获与释放癌细胞 | 第83页 |
| ·适配子-量子点磁纳米微球俘获癌细胞 | 第83页 |
| ·适配子-量子点磁纳米微球释放癌细胞 | 第83页 |
| ·适配子的结合靶标的初步研究 | 第83-84页 |
| ·适配子靶标的分离与确定 | 第84页 |
| ·胃癌适配子的临床应用之三—荧光探针 | 第84-87页 |
| ·适配子荧光探针的设计 | 第84-86页 |
| ·靶细胞激活适配子荧光探针 | 第86页 |
| ·适配子荧光探针在小鼠体内成像 | 第86-87页 |
| ·结果与讨论 | 第87-94页 |
| ·免疫组化实验结果—胃癌细胞适配子与组织的结合 | 第87-88页 |
| ·适配子结合靶标的初步确定 | 第88页 |
| ·适配子结合靶标的分离与确定 | 第88-90页 |
| ·适配子俘获与释放癌细胞 | 第90-92页 |
| ·适配子-磁纳米微球的表征 | 第90页 |
| ·适配子俘获与释放胃癌细胞 | 第90-92页 |
| ·适配子荧光探针检测癌细胞的体内与体外研究 | 第92-93页 |
| ·靶细胞激活适配子荧光探针 | 第92页 |
| ·适配子体内检测癌细胞 | 第92-93页 |
| ·适配子荧光探针在小鼠体内成像 | 第93-94页 |
| ·本章小结 | 第94-95页 |
| 第六章 肝癌细胞适配子的筛选 | 第95-130页 |
| ·材料与方法 | 第95-96页 |
| ·实验试剂与材料 | 第95页 |
| ·主要的仪器 | 第95页 |
| ·细胞培养 | 第95-96页 |
| ·肝癌细胞适配子的筛选 | 第96-97页 |
| ·流式细胞术实验和共聚焦显微镜监测文库的富集 | 第96-97页 |
| ·克隆测序及二级结构分析 | 第97页 |
| ·肝癌单一适配子结合力的测定 | 第97页 |
| ·截短适配子的特异性分析 | 第97页 |
| ·适配子的临床应用的初步研究 | 第97-98页 |
| ·适配子结构改造极其结合力的测定 | 第98页 |
| ·适配子的结构改造 | 第98页 |
| ·结构改造后的适配子的结合力的测定 | 第98页 |
| ·结构改造后的适配子与L-02人正常肝细胞的结合力的测定 | 第98页 |
| ·结果与讨论 | 第98-107页 |
| ·流式细胞术实验检测文库的富集 | 第98-99页 |
| ·共聚焦实验监测文库的富集 | 第99-100页 |
| ·克隆、测序 | 第100页 |
| ·测序 | 第100-107页 |
| ·克隆的测序结果 | 第100-101页 |
| ·肝癌适配子二级结构模拟 | 第101-102页 |
| ·肝癌适配子序列的截短 | 第102-103页 |
| ·截短的肝癌适配子序列的二级结构模拟 | 第103-107页 |
| ·肝癌细胞截短后的单一适配子结合力的测定 | 第107-111页 |
| ·肝癌细胞适配子的特异性检测 | 第111-122页 |
| ·共聚焦显微镜分析适配子的特异性 | 第111-115页 |
| ·流式细胞术分析适配子的特异性 | 第115-121页 |
| ·各条适配子与Huh7.5.1肝癌细胞的结合情况 | 第115页 |
| ·各条适配子与HepG2肝癌细胞的结合情况 | 第115-116页 |
| ·各条适配子与97L肝癌细胞的结合情况 | 第116-117页 |
| ·各条适配子与LM9肝癌细胞的结合情况 | 第117页 |
| ·各条适配子与HeLa宫颈癌细胞的结合情况 | 第117-118页 |
| ·各条适配子与HT29胰腺癌细胞的结合情况 | 第118-119页 |
| ·各条适配子与GES-1胃黏膜细胞的结合情况 | 第119页 |
| ·各条适配子与Hs578Bst人乳腺上皮细胞的结合情况 | 第119-120页 |
| ·各条适配子与L-02人正常肝细胞的结合情况 | 第120-121页 |
| ·小结与讨论 | 第121-122页 |
| ·肝癌适配子的临床应用的初步研究 | 第122-125页 |
| ·适配子与人的肝癌组织结合 | 第122-124页 |
| ·适配子与人的正常肝组织结合 | 第124-125页 |
| ·适配子的碱基修饰 | 第125-126页 |
| ·碱基修饰的适配子的结合力的测定 | 第126-128页 |
| ·碱基修饰后的适配子序列与Huh7.5.1靶肝癌细胞的结合能力测定 | 第126-128页 |
| ·碱基修饰后的适配子序列与L-02正常细胞的结合能力测定 | 第128页 |
| ·小结 | 第128-130页 |
| 参考文献 | 第130-149页 |
| 全文总结 | 第149-152页 |
| 致谢 | 第152-153页 |
| 附录 | 第153-178页 |
