| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-16页 |
| 缩略词表 | 第16-18页 |
| 前言 | 第18-28页 |
| 一、 类风湿关节炎及药物治疗简介 | 第18-21页 |
| 二、 NF κB 信号通路及其抑制剂在治疗 RA 方面的应用 | 第21-23页 |
| 三、 IKK 复合物的泛素化激活 TNF α介导的 NF κB 通路 | 第23-25页 |
| 四、 中药旋覆花中倍半萜内酯在治疗 RA 方面的应用前景 | 第25-28页 |
| 第一章 IJ 5 体内药效学研究 | 第28-46页 |
| 一、 引言 | 第28页 |
| 二、 实验材料 | 第28-30页 |
| （一） 实验动物 | 第28-29页 |
| （二） 药品与试剂 | 第29页 |
| （三） 实验仪器 | 第29-30页 |
| 三、 实验方法 | 第30-37页 |
| （一） 溶液配制 | 第30-31页 |
| （二） CIA 小鼠模型建立与关节炎指数测定 | 第31页 |
| （三） 取材 | 第31-32页 |
| （四） microCT 成像和 HE 染色分析 | 第32页 |
| （五） 血清中胶原抗体测定 | 第32-33页 |
| （六） 血清中炎症因子测定 | 第33-34页 |
| （七） Real time PCR 法检测关节组织中相关炎症因子的 mRNA | 第34-36页 |
| （八） 统计分析方法 | 第36-37页 |
| 四、 实验结果 | 第37-42页 |
| （一） IJ 5 对 CIA 模型小鼠的治疗作用 | 第37-38页 |
| （二） IJ 5 对 CIA 关节炎模型小鼠的关节的保护作用 | 第38-40页 |
| （三） IJ 5 对 CIA 模型小鼠血清中的抗体表达的影响 | 第40页 |
| （四） IJ 5 对 CIA 模型小鼠血清中的主要炎症因子水平的影响 | 第40-42页 |
| 五、 小结与讨论 | 第42-46页 |
| 第二章 IJ 5 的体外药效学研究 | 第46-68页 |
| 一、 引言 | 第46-47页 |
| 二、 实验材料 | 第47-49页 |
| （一） 原代细胞及细胞株 | 第47页 |
| （二） 药品和试剂 | 第47-48页 |
| （三） 主要仪器 | 第48-49页 |
| 三、 实验方法 | 第49-57页 |
| （一） 溶液配制 | 第49-52页 |
| （二） RA 原代滑膜细胞活力检测（MTT 法） | 第52页 |
| （三） RA 滑膜细胞中炎症因子 mRNA 检测 | 第52-54页 |
| （四） 细胞上清中炎症因子检测 | 第54页 |
| （五） 双荧光素酶报告基因核转录因子活性检测 47 | 第54-55页 |
| （六） Western Blot 方法检测滑膜细胞内的 NF κB 信号通路因子 | 第55-57页 |
| 四、 统计分析方法 | 第57-58页 |
| 五、 实验结果 | 第58-65页 |
| （一） IJ 5 对 TNF α诱导的细胞活力的影响 | 第58-59页 |
| （二） IJ 5 对滑膜细胞中炎症因子 mRNA 表达的影响 | 第59-60页 |
| （三） IJ 5 对滑膜细胞上清中部分炎症因子水平的影响 | 第60-61页 |
| （五） IJ 5 对 TNF α诱导的 NF κB 激活的影响 | 第61页 |
| （六） IJ 5 对 MAPKs 信号通路的影响 | 第61-63页 |
| （七） IJ 5 对 NF κB 信号通路的影响 | 第63-65页 |
| 六、 小结与讨论 | 第65-68页 |
| 第三章 IJ 5 的作用靶点研究 | 第68-103页 |
| 一、 引言 | 第68-72页 |
| 二、 实验材料 | 第72-75页 |
| （一） 细胞株 | 第72-73页 |
| （二） 药品和试剂 | 第73-74页 |
| （三） 主要仪器 | 第74-75页 |
| 三、 实验方法 | 第75-89页 |
| （一） 主要试剂配制 | 第75-77页 |
| （二） Hsp90 活性测定 | 第77-78页 |
| （三） IKK 及其上游激酶的活性检测 | 第78-79页 |
| （四） 293T 细胞内 RIP 及 NEMO 的泛素化水平检测 | 第79-83页 |
| （五） 体外泛素酶活测定 | 第83-84页 |
| （六） Pull down 实验 | 第84-86页 |
| （七） Bicore 实验 | 第86-87页 |
| （八） LC MS 确定 IJ 5 与 UbcH5c 的共价结合位点 | 第87-88页 |
| （九） 计算机拟合 IJ 5 与 UbcH5c 的结合方式 | 第88-89页 |
| 四、 结果 | 第89-100页 |
| （一） IJ 5 对 HSP90 酶活的影响 | 第89-90页 |
| （二） IJ 5 对 IKKβ及其上游激酶酶活的影响 | 第90-92页 |
| （三） IJ 5 对泛素化的影响 | 第92-94页 |
| （四） IJ 5 对体外泛素链形成的影响 | 第94页 |
| （五） IJ 5 对不同 E2 介导的泛素链形成的影响 | 第94-96页 |
| （六） IJ 5 对 E2 Ub 聚合物形成的影响 | 第96页 |
| （七） Pull Down 法验证 IJ 5 与 UbcH5c 的结合作用 | 第96-97页 |
| （八） Biacore 法检测 IJ 5 与 Ubc5 的相互作用 | 第97-98页 |
| （九） LC MS 法寻找 IJ 5 与 UbcH5c 的结合位点 | 第98-99页 |
| （十） 计算机拟合 IJ 5 与 UbcH5c 的结合方式 | 第99-100页 |
| 五、 小结 | 第100-103页 |
| 总结 | 第103-105页 |
| 参考文献 | 第105-115页 |
| 致谢 | 第115页 |
