| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-10页 |
| 1 前言 | 第10-19页 |
| ·硫代葡萄糖苷/芥子酶防御系统简介 | 第10-13页 |
| ·硫代葡萄糖苷/芥子酶酶防御系统的特性 | 第10-11页 |
| ·硫代葡萄糖苷简介 | 第11页 |
| ·芥子酶的特性 | 第11-12页 |
| ·硫代葡萄糖苷/芥子酶防御系统的起源进化 | 第12-13页 |
| ·番木瓜的研究价值 | 第13页 |
| ·毕赤酵母表达系统简介 | 第13-14页 |
| ·组氨酸标签蛋白纯化技术简介 | 第14-15页 |
| ·芥子酶活力测定方法简介 | 第15-17页 |
| ·本实验研究目的及意义 | 第17-18页 |
| ·实验技术路线 | 第18-19页 |
| 2 实验材料、试剂及仪器 | 第19-25页 |
| ·植物材料 | 第19页 |
| ·菌株与质粒 | 第19-20页 |
| ·主要仪器 | 第20-21页 |
| ·主要的试剂盒及药品 | 第21-22页 |
| ·主要培养基及试剂配方 | 第22-23页 |
| ·主要培养基配方 | 第22页 |
| ·主要试剂配方 | 第22-23页 |
| ·PCR扩增引物 | 第23-25页 |
| 3 实验方法 | 第25-37页 |
| ·番木瓜芥子酶基因组织差异表达分析 | 第25-27页 |
| ·RNA的提取 | 第25-26页 |
| ·反转录合成cDNA第一链 | 第26页 |
| ·反转录cDNA质量验证 | 第26-27页 |
| ·番木瓜芥子酶基因CpTGGs组织差异表达RT-PCR分析 | 第27页 |
| ·生物信息学分析 | 第27-28页 |
| ·番木瓜芥子酶理化性质分析 | 第27页 |
| ·番木瓜芥子酶亚细胞定位分析 | 第27-28页 |
| ·CpTGGs与部分典型芥子酶、O-β-葡萄糖苷酶序列比对分析 | 第28页 |
| ·芥子酶系统发育分析 | 第28页 |
| ·毕赤酵母中表达番木瓜芥子酶基因 | 第28-33页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第28-31页 |
| ·重组载体转化毕赤酵母 | 第31-32页 |
| ·重组蛋白的大量表达 | 第32-33页 |
| ·纯化重组蛋白 | 第33页 |
| ·重组CpTGG1浓度测定及SDS-PAGE | 第33-35页 |
| ·重组CpTGG1蛋白浓度测定 | 第33-34页 |
| ·重组蛋白CpTGG1 SDS-PAGE检测 | 第34-35页 |
| ·重组蛋白CpTGG1分子量的计算 | 第35页 |
| ·重组CpTGG1酶促动力学特性分析 | 第35-36页 |
| ·重组CpTGG1底物特异性研究 | 第36-37页 |
| 4 实验结果与分析 | 第37-56页 |
| ·番木瓜芥子酶基因组织差异表达分析 | 第37-39页 |
| ·RNA提取结果 | 第37-38页 |
| ·番木瓜芥子酶基因组织差异表达RT-PCR分析 | 第38-39页 |
| ·生物信息学分析结果 | 第39-46页 |
| ·番木瓜芥子酶CpTGGs的理化性质分析 | 第39-40页 |
| ·番木瓜芥子酶CpTGGs信号肽预测分析 | 第40-41页 |
| ·番木瓜芥子酶CpTGGs亚细胞定位预测 | 第41-42页 |
| ·CpTGGs与部分典型芥子酶、O-β-葡萄糖苷酶序列比对结果分析 | 第42-44页 |
| ·芥子酶系统发育分析 | 第44-46页 |
| ·CpTGG1和CpTGG3克隆、载体构建及酵母表达结果分析 | 第46页 |
| ·重组番木瓜芥子酶CpTGG1 SDS-PAGE检测分析 | 第46-47页 |
| ·重组CpTGG1 SDS-PAGE检测 | 第46-47页 |
| ·重组CpTGG1蛋白分子量的计算 | 第47页 |
| ·重组CpTGG1酶学特性 | 第47-54页 |
| ·重组CpTGG1蛋白浓度测定 | 第47页 |
| ·重组CpTGG1酶学特性研究 | 第47-54页 |
| ·重组CpTGG1底物特异性研究 | 第54-56页 |
| 5 讨论 | 第56-59页 |
| ·关于芥子酶的组织表达差异性 | 第56页 |
| ·关于硫代葡萄糖苷/芥子酶防御系统的调控机制 | 第56-57页 |
| ·关于硫代葡萄糖苷/芥子酶的起源进化 | 第57-58页 |
| ·关于番木瓜芥子酶对底物分解的特异性 | 第58页 |
| ·关于番木瓜芥子酶基因的研究前景 | 第58-59页 |
| 6 结论 | 第59-60页 |
| 附录1:缩写词表(Abbreviation) | 第60-61页 |
| 附录2:CpTGGs cDNA碱基序列比较 | 第61-64页 |
| 附录3:CpTGGs氨基酸序列比较 | 第64-65页 |
| 参考文献 | 第65-71页 |
| 致谢 | 第71页 |
