| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-22页 |
| ·LEA 蛋白的研究进展 | 第11-18页 |
| ·LEA 蛋白的分类及其特点 | 第11-12页 |
| ·LEA 蛋白的表达及亚细胞定位 | 第12-14页 |
| ·LEA 蛋白的二级结构研究 | 第14-15页 |
| ·LEA 蛋白的表达可以提高转基因生物的抗逆性 | 第15页 |
| ·LEA 蛋白的保护作用及其作用机理 | 第15-18页 |
| ·ASR 蛋白的研究进展 | 第18-19页 |
| ·IDP 蛋白的研究进展 | 第19-21页 |
| ·IDP 蛋白的发现 | 第19-20页 |
| ·IDP 蛋白的结构特征 | 第20-21页 |
| ·IDP 蛋白多分子识别特性及其生物学功能 | 第21页 |
| ·本研究目的和意义 | 第21-22页 |
| 第二章 大豆 GmASR 蛋白对酵母突变体细胞的保护作用 | 第22-36页 |
| 引言 | 第22-23页 |
| ·材料 | 第23-26页 |
| ·植物材料和基因序列 | 第23页 |
| ·大肠杆菌、酵母菌株和载体 | 第23-24页 |
| ·试剂盒、酶及化学试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器设备 | 第25页 |
| ·引物 | 第25页 |
| ·培养基及主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-30页 |
| ·大豆叶片 RNA 的获得及反转录 | 第26-27页 |
| ·GmASR 基因的扩增并与 pMD18-T simple 载体的相连 | 第27-28页 |
| ·大肠杆菌感受态的制备及转化 | 第28页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取，PCR 验证及测序 | 第28-29页 |
| ·酵母表达载体 pYES2/GmASR 的构建 | 第29页 |
| ·酵母感受态细胞的制备及转化 | 第29-30页 |
| ·酵母重组子的菌落 PCR 及 RNA 验证 | 第30页 |
| ·胁迫条件下酵母生长状态的测定 | 第30页 |
| ·结果 | 第30-34页 |
| ·GmASR 基因的分析及扩增 | 第30-31页 |
| ·获得转 GmASR 基因的酵母细胞 | 第31-32页 |
| ·大豆 GmASR 蛋白的表达可提高酵母突变体（ CUP2）的抗 Cu~(2+)胁迫的能力 | 第32-33页 |
| ·大豆 GmASR 蛋白的表达可提高酵母突变体（ ZRC1）的耐 Zn~(2+)胁迫的能力 | 第33页 |
| ·大豆 GmASR 蛋白可提高酵母突变体（ HOG）的耐盐性 | 第33-34页 |
| ·讨论 | 第34-36页 |
| 第三章 大豆 GmASR 蛋白能提高烟草悬浮细胞 BY-2 抵抗 Cu~(2+)胁迫的能力 | 第36-42页 |
| 引言 | 第36页 |
| ·材料 | 第36-37页 |
| ·烟草细胞，农杆菌和质粒 | 第36-37页 |
| ·引物 | 第37页 |
| ·主要培养基及抗生素 | 第37页 |
| ·方法 | 第37-39页 |
| ·烟草表达载达 pCAMBIA1300/GmASR 的构建 | 第37页 |
| ·根癌农杆菌感受态的制备及转化 | 第37-38页 |
| ·烟草细胞的培养 | 第38页 |
| ·烟草细胞的转化 | 第38页 |
| ·转基因细胞系的分子生物学鉴定 | 第38-39页 |
| ·转基因烟草细胞在高 Cu~(2+)培养基条件下的生长 | 第39页 |
| ·结果 | 第39-41页 |
| ·植物表达载体的构建及转化农杆菌 | 第39页 |
| ·转基因烟草细胞系的获得 | 第39-40页 |
| ·GmASR 基因的表达可以提高 BY-2 细胞耐 Cu~(2+)胁迫的能力 | 第40-41页 |
| ·讨论 | 第41-42页 |
| 第四章 GmASR 蛋白与金属离子结合及抗氧化功能 | 第42-61页 |
| 引言 | 第42-43页 |
| ·材料 | 第43-44页 |
| ·菌种和载体 | 第43页 |
| ·引物 | 第43页 |
| ·亲和层析使用试剂 | 第43-44页 |
| ·SDS-PAGE 凝胶蛋白质电泳及常用试剂 | 第44页 |
| ·仪器 | 第44页 |
| ·方法 | 第44-50页 |
| ·GmASR 蛋白的生物信息学分析 | 第44-45页 |
| ·大肠杆菌表达载体 pET28a/GmASR 的构建 | 第45页 |
| ·大肠杆菌质粒的提取、PCR 鉴定、测序及转化大肠杆菌 BL21 star | 第45页 |
| ·GmASR 蛋白的表达、分离纯化、质谱鉴定及定量 | 第45-47页 |
| ·正常条件下 GmASR 蛋白的 CD 谱 | 第47页 |
| ·GmASR 蛋白热稳定性分析 | 第47页 |
| ·固相亲和层析法研究 GmASR 蛋白和金属离子的相互作用 | 第47-48页 |
| ·利用内源荧光法研究 GmASR 蛋白与 Fe~(3+)离子和 Zn~(2+)离子的相互作用 | 第48页 |
| ·利用 ITC 研究 GmASR 蛋白与 Fe~(3+)离子和 Zn~(2+)离子的相互作用 | 第48页 |
| ·CD 法测定 GmASR 蛋白的二级结构 | 第48-49页 |
| ·GmASR 蛋白结合 Fe~(3+)或 Zn~(2+)后的 ANS 法荧光分析 | 第49页 |
| ·SDS-PAGE 法检测 Zn~(2+)诱导 GmASR 蛋白的聚集 | 第49页 |
| ·羟基自由基清除实验 | 第49页 |
| ·DNA 保护实验 | 第49-50页 |
| ·结果 | 第50-59页 |
| ·GmASR 蛋白的生物信息学分析 | 第50-51页 |
| ·GmASR 蛋白的表达、纯化及鉴定 | 第51-53页 |
| ·GmASR 蛋白具有热稳定性 | 第53页 |
| ·GmASR 蛋白的 CD 谱分析 | 第53-54页 |
| ·GmASR 蛋白可与多种金属离子结合 | 第54-55页 |
| ·Fe~(3+)和 Zn~(2+)对 GmASR 蛋白结构具有不同影响 | 第55-57页 |
| ·GmASR 蛋白具有 Fe~(3+)结合的抗氧化能力 | 第57-59页 |
| ·讨论 | 第59-61页 |
| 第五章 GmASR 蛋白保护 LDH 酶的研究 | 第61-71页 |
| 引言 | 第61页 |
| ·材料 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-63页 |
| ·乳酸脱氢酶（LDH）活性测定原理 | 第61-62页 |
| ·样品处理及 LDH 酶活性测定 | 第62页 |
| ·GmASR 蛋白防止胁迫下 LDH 酶聚集 | 第62-63页 |
| ·ANS 荧光实验 | 第63页 |
| ·结果 | 第63-69页 |
| ·GmASR 蛋白对冻融胁迫下的 LDH 酶具有保护作用 | 第63-64页 |
| ·GmASR 蛋白可阻止冻融胁迫下 LDH 酶聚集 | 第64-66页 |
| ·GmASR 蛋白对干燥胁迫下的 LDH 酶活性的具有保护作用 | 第66页 |
| ·干燥胁迫下对 LDH 酶结构影响不明显 | 第66-67页 |
| ·GmASR 蛋白对热胁迫下的 LDH 酶活性的保护作用不明显 | 第67-68页 |
| ·GmASR 蛋白可部分阻止热胁迫下的 LDH 的聚集 | 第68-69页 |
| ·讨论 | 第69-71页 |
| 主要结论和创新点 | 第71-73页 |
| 结论 | 第71-72页 |
| 创新点 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 附录 | 第80-81页 |
| 致谢 | 第81-82页 |
| 在学期间参加科研项目情况 | 第82-83页 |
| 在学期间公开发表论文及著作情况 | 第83页 |
