| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-11页 |
| 引言 | 第11-13页 |
| 1 实验设计方案 | 第13-16页 |
| ·实验目的和意义 | 第13页 |
| ·研究内容 | 第13-14页 |
| ·技术流程 | 第14页 |
| ·实验方案 | 第14-16页 |
| 2 实验材料和方法 | 第16-37页 |
| ·材料 | 第16-18页 |
| ·细胞株、大肠杆菌和载体 | 第16页 |
| ·耗材 | 第16页 |
| ·实验设备 | 第16-18页 |
| ·主要试剂和配制 | 第18-26页 |
| ·主要试剂 | 第18-20页 |
| ·培养基（RPM-1640） | 第20页 |
| ·PBS 溶液 | 第20-21页 |
| ·D-Hanks 溶液 | 第21页 |
| ·胰酶（0.25% ） | 第21页 |
| ·50×Tris-醋酸（TAE） | 第21页 |
| ·蛋白裂解液 | 第21页 |
| ·1 % 琼脂糖凝胶 | 第21-22页 |
| ·10% SDS 的配制 | 第22页 |
| ·PMSF（10 mmol/L） | 第22页 |
| ·5×SDS 上样缓冲液 | 第22页 |
| ·1 mol / L Tris·HCL (pH=6.8) | 第22页 |
| ·1.5 mol / L Tris·HCL (pH=8.8) | 第22-23页 |
| ·30 % Acr : Bis 混合液 | 第23页 |
| ·10 % AP | 第23页 |
| ·10 % 分离胶（10 ml） | 第23页 |
| ·5 % 浓缩胶（5 ml） | 第23-24页 |
| ·蛋白电泳缓冲液 | 第24页 |
| ·蛋白转膜缓冲液 | 第24页 |
| ·TBS 缓冲液 | 第24页 |
| ·TBST 缓冲液 | 第24-25页 |
| ·MTT 溶液（5 mg / ml） | 第25页 |
| ·0.5 M EDTA(PH=8.0) | 第25页 |
| ·1 M Tris（PH=8.0） | 第25页 |
| ·1× TE Buffer | 第25页 |
| ·LB 液体培养基 | 第25-26页 |
| ·LB 固体培养基（氨苄） | 第26页 |
| ·实验方法 | 第26-37页 |
| ·培养细胞和细胞传代 | 第26页 |
| ·冻存细胞 | 第26-27页 |
| ·复苏细胞 | 第27页 |
| ·用 MTT 检测细胞的生长情况 | 第27页 |
| ·设计 miR-31 的阻遏物以及类似物 | 第27页 |
| ·96 孔板中转染 RNAs | 第27-28页 |
| ·提取细胞的总蛋白 | 第28页 |
| ·测定所提蛋白的含量（碧云天 Bradford 试剂盒） | 第28页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第28-29页 |
| ·转膜（半干法） | 第29页 |
| ·免疫反应 | 第29-30页 |
| ·细胞培养瓶中总 RNA 的提取 | 第30页 |
| ·RNA 含量测定 | 第30页 |
| ·逆转录反应（miRNA） | 第30-31页 |
| ·逆转录反应（mRNA） | 第31页 |
| ·实时定量 PCR | 第31-32页 |
| ·制备 TG1 大肠杆菌感受态细胞 | 第32-33页 |
| ·TG1 大肠杆菌感受态细胞的转化 | 第33页 |
| ·核酸内切酶（XbaI）单酶切 | 第33页 |
| ·凝胶电泳（以 1 % 琼脂糖为例） | 第33-34页 |
| ·回收酶切产物（AxyPrep DNA 凝胶回收试剂盒） | 第34页 |
| ·连接 | 第34-35页 |
| ·提取构建好的质粒 DNA（天根高纯度质粒抽提试剂盒） | 第35页 |
| ·双荧光素酶报告基因检测系统的操作 | 第35-36页 |
| ·细胞凋亡（流式细胞仪） | 第36页 |
| ·统计方法 | 第36-37页 |
| 3 实验结果 | 第37-50页 |
| ·筛选对顺铂耐药和敏感的肺癌细胞株 | 第37-39页 |
| ·miR-31 在耐药肺癌细胞中显著高表达 | 第39-40页 |
| ·过表达 miR-31 ，增加细胞对 DDP 的耐药性 | 第40-41页 |
| ·抑制 miR-31 的表达，增加细胞对 DDP 的敏感性 | 第41-42页 |
| ·miR-31 负调控 ABCB9 的表达 | 第42-44页 |
| ·下调 ABCB9 表达，可使 miR-31 表达升高 | 第44-45页 |
| ·ABCB9 是 miR-31 的直接作用靶点 | 第45-46页 |
| ·下调 ABCB9 可增加细胞对 DDP 的耐药性 | 第46-47页 |
| ·异常表达 miR-31 表达可影响 DDP 诱导的细胞凋亡变化 | 第47-50页 |
| 4 结论 | 第50-51页 |
| 5 讨论 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-56页 |
| 附录 A 缩写表 | 第56-57页 |
| 附录 B 综述 | 第57-72页 |
| 参考文献（References） | 第67-72页 |
| 在学研究成果 | 第72-74页 |
| 致谢 | 第74页 |
