| 缩略词表 | 第1-7页 |
| 摘要 | 第7-10页 |
| Abstract | 第10-13页 |
| 前言 | 第13-27页 |
| 1 炭疽毒素 | 第14-15页 |
| 2 TEM8 和 CMG2 的蛋白结构 | 第15-20页 |
| 3 TEM8 和 CMG2 的表达 | 第20-21页 |
| 4 TEM8/CMG2 与细胞外基质蛋白的相互作用及它们的生理功能 | 第21-24页 |
| 5 TEM8/CMG2 与胞内蛋白的相互作用 | 第24-26页 |
| 6 靶向 TEM8 的肿瘤治疗 | 第26-27页 |
| 第一部分 TEM8 和 CMG2 生理功能研究 | 第27-41页 |
| 1 材料 | 第27-29页 |
| ·质粒、感受态和细胞系 | 第27页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第27-28页 |
| ·主要化学试剂配制 | 第28页 |
| ·主要仪器设备 | 第28-29页 |
| 2 方法 | 第29-32页 |
| ·Myc-TEM8-EGFP 和 Myc-CMG2-EGFP 真核表达载体的构建 | 第29-30页 |
| ·目的基因载体转染 HEK293 细胞 | 第30页 |
| ·细胞的稳定筛选和单克隆化 | 第30页 |
| ·Western blot 检测融合蛋白 Myc-TEM8-EGFP 和 Myc-CMG2-EGFP 的表达水平 | 第30-31页 |
| ·CCK8 法检测转染 TEM8 或 CMG2 对细胞增殖的影响 | 第31页 |
| ·Woundhealing 实验（细胞划痕法）检测转染 TEM8 或 CMG2 对细胞体外迁移的影响 | 第31页 |
| ·软琼脂克隆形成实验检测转染 TEM8 或 CMG2 对细胞克隆形成的影响 | 第31-32页 |
| 3 结果 | 第32-40页 |
| ·pcDNA3.1(+)/EGFP 真核表达载体的构建及鉴定 | 第32-33页 |
| ·目的基因（Myc-TEM8 和 Myc-CMG2）的获得（优化合成） | 第33-35页 |
| ·pcDNA3.1(+)/Myc-TEM8-EGFP 和 pcDNA3.1(+)/Myc-CMG2-EGFP真核表达载体的构建及鉴定 | 第35-36页 |
| ·Western blot 检测融合蛋白 Myc-TEM8-EGFP 和 Myc-CMG2-EGFP 的表达水平 | 第36-37页 |
| ·TEM8 或 CMG2 的过表达对 HEK293 细胞生长的影响 | 第37页 |
| ·TEM8 或 CMG2 的过表达对 HEK293 细胞体外迁移能力的影响 | 第37-38页 |
| ·过表达 TEM8 或 CMG2 对 HEK293 细胞转化能力的影响 | 第38-40页 |
| 4 小结 | 第40-41页 |
| 第二部分 TEM8 相互作用蛋白的研究 | 第41-61页 |
| 1 材料 | 第41-42页 |
| ·细胞系 | 第41页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第41-42页 |
| ·主要化学试剂配制 | 第42页 |
| ·主要仪器设备 | 第42页 |
| 2 方法 | 第42-48页 |
| ·TEM8-Fc 相互作用蛋白的亲和纯化 | 第42-44页 |
| ·质谱分析及鉴定 | 第44页 |
| ·免疫沉淀（Fc pull-down）和免疫印记验证 TEM8-Fc 与重组 uPA 的相互作用 | 第44-45页 |
| ·ELISA 检测 TEM8-Fc 与重组 uPA 的结合能力 | 第45-46页 |
| ·表面等离子体共振（SPR）方法测定 TEM8-Fc 与 uPA 的结合常数 | 第46页 |
| ·溶圈法检测 TEM8-Fc 与 uPA 的结合对 uPA 活性的影响 | 第46-47页 |
| ·发色底物 S-2444 法检测 uPA 结合到细胞表面后的活性 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-60页 |
| ·确定 TEM8 的相互作用蛋白 | 第48-50页 |
| ·免疫沉淀方法验证 uPA 和 alpha enolase 与 TEM8 的相互作用 | 第50-54页 |
| ·ELISA 方法验证 uPA 与 TEM8 的相互作用 | 第54页 |
| ·SPR 方法测定 TEM8-Fc 与几种重组 uPA 之间相互作用的反应动力学常数 | 第54-57页 |
| ·TEM8 与 uPA 的结合对 uPA 酶活性的影响 | 第57页 |
| ·uPA 与细胞表面 TEM8 的结合 | 第57-60页 |
| 4 小结 | 第60-61页 |
| 第三部分 uPA 与 TEM8 的相互作用区域研究 | 第61-74页 |
| 1 材料 | 第61-62页 |
| ·细胞系 | 第61页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第61页 |
| ·主要化学试剂配制 | 第61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61-62页 |
| 2 方法 | 第62-66页 |
| ·FRET 载体的构建 | 第62-65页 |
| ·稳定细胞株的构建 | 第65页 |
| ·共聚焦显微镜 FRET 成像 | 第65-66页 |
| ·其他方法 | 第66页 |
| 3 结果 | 第66-73页 |
| ·真核表达载体 pcDNA3.1(+)(hygro)/TEM8-N-RFP 的构建及其鉴定 | 第66-67页 |
| ·TEM8-N-RFP 融合蛋白的表达 | 第67-68页 |
| ·uPA 截短型突变体与 EGFP 重组真核表达载体的构建及其鉴定 | 第68-69页 |
| ·uPA 截短突变体与 EGFP 的融合蛋白的表达 | 第69-70页 |
| ·共聚焦显微镜 FRET 成像 | 第70-73页 |
| 4 小结 | 第73-74页 |
| 第四部分 TEM8 与 uPA 相互作用的生物学意义研究 | 第74-89页 |
| 1 材料 | 第75-76页 |
| ·细胞系 | 第75页 |
| ·实验动物 | 第75页 |
| ·主要试剂和耗材 | 第75-76页 |
| ·主要化学试剂配制 | 第76页 |
| ·主要仪器设备 | 第76页 |
| 2 方法 | 第76-80页 |
| ·流式细胞仪检测分析 | 第76-77页 |
| ·TEM8 磷酸化分析 | 第77页 |
| ·人 RTK 和 EGFR 磷酸化抗体芯片筛选 | 第77-78页 |
| ·细胞免疫荧光检测 TEM8 和 EGFR 的细胞定位 | 第78-79页 |
| ·软琼脂克隆形成实验检测 LMW-uPA 对细胞集落形成能力的影响 | 第79页 |
| ·侵袭实验检测 TEM8 在 uPA 诱导的细胞侵袭中的作用 | 第79-80页 |
| ·肿瘤生长实验检测 TEM8-Fc 和 ATF-Fc 联合抗肿瘤效果 | 第80页 |
| 3 结果 | 第80-87页 |
| ·uPA 与 TEM8 的结合诱导 TEM8 发生磷酸化 | 第80-81页 |
| ·uPA 与 TEM8 的结合诱导 EGFR 发生磷酸化 | 第81-85页 |
| ·TEM8/uPA 相互作用对肿瘤生长和迁移起到重要作用 | 第85-87页 |
| ·TEM8-Fc 和 ATF-Fc 具有协同抗肿瘤活性 | 第87页 |
| 4 小结 | 第87-89页 |
| 讨论 | 第89-99页 |
| 1 TEM8 与 CMG2 的比较 | 第89-90页 |
| 2 实验方法的探讨 | 第90-93页 |
| 3 实验结果讨论 | 第93-97页 |
| 4 下一步课题的研究展望 | 第97-99页 |
| 结论 | 第99-101页 |
| 参考文献 | 第101-115页 |
| 文献综述：炭疽毒素受体结构和功能研究进展 | 第115-129页 |
| 参考文献 | 第124-129页 |
| 个人简历 | 第129-130页 |
| 发表文章 | 第130-131页 |
| 致谢 | 第131页 |
