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展示JEV表位的猪细小病毒病毒样颗粒的制备及JEV弱毒株感染性克隆的构建

附件第1-6页
摘要第6-8页
Abstract第8-13页
英文缩略表第13-15页
第一章 文献综述第15-28页
   ·日本脑炎概述第15-22页
     ·日本脑炎的流行病学研究进展第15-17页
     ·日本脑炎的病原学特性第17-19页
     ·JEV 的复制第19-20页
     ·日本脑炎的诊断方法第20页
     ·日本脑炎疫苗的研究进展第20-21页
     ·JEV 感染性克隆的研究进展第21-22页
   ·多表位疫苗的构建策略研究进展第22-24页
     ·多表位疫苗的设计第23-24页
     ·前景展望第24页
   ·猪细小病毒病概述第24-28页
     ·猪细小病毒病的流行病学研究进展第24-25页
     ·猪细小病毒的病原学特性第25-26页
     ·猪细小病毒的诊断方法第26页
     ·猪细小病毒疫苗的研究进展第26-28页
第二章 展示 JEV 多 B 细胞表位和 T 细胞表位的 PPV 病毒样颗粒的制备第28-40页
   ·材料第28-29页
     ·质粒和菌株第28页
     ·主要试剂第28-29页
   ·方法第29-36页
     ·目的基因的扩增第29-31页
     ·目的基因的克隆第31-32页
     ·原核表达载体的构建第32-33页
     ·重组质粒的原核表达及蛋白纯化第33-36页
   ·结果第36-38页
     ·目的基因的扩增及构建的原核重组表达载体的鉴定第36-37页
     ·MEP-VP2 重组蛋白的表达第37页
     ·MEP-VP2 重组蛋白的纯化第37页
     ·纯化产物的 Western blotting 分析第37页
     ·病毒样颗粒的电镜观察第37-38页
   ·讨论第38-40页
第三章 病毒样颗粒在小鼠模型上的免疫原性评价第40-46页
   ·材料第40-41页
     ·细胞与毒株第40页
     ·主要试剂第40-41页
     ·实验动物第41页
   ·方法第41-42页
     ·小鼠免疫与攻毒实验第41页
     ·ELISA 检测抗体滴度第41-42页
     ·噬斑减少中和试验第42页
     ·免疫小鼠脾脏单个淋巴细胞悬液的制备第42页
     ·CTL 效应第42页
   ·结果第42-45页
     ·抗体滴度的测定第42-43页
     ·中和抗体滴度测定第43-44页
     ·CTL 效应第44-45页
   ·讨论第45-46页
第四章 JEV 弱毒株 SA14-14-2 感染性克隆的构建第46-54页
   ·实验材料第46页
   ·方法第46-50页
     ·SA14-14-2 疫苗株基因组全长 cDNA 的扩增第46-48页
     ·病毒的拯救第48-49页
     ·SA14-14-2 疫苗株感染性克隆的鉴定第49-50页
   ·结果第50-53页
     ·SA14-14-2 疫苗株各片段的 RT-PCR 扩增结果第50页
     ·恢复病毒的产生及放大培养第50-51页
     ·间接免疫荧光鉴定恢复病毒第51页
     ·RT-PCR 鉴定恢复病毒及基因组测序第51-52页
     ·病毒空斑表型第52页
     ·病毒的生长曲线第52-53页
   ·讨论第53-54页
第五章 全文总结第54-55页
参考文献第55-63页
致谢第63-64页
作者简历第64页

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