| 摘要 | 第1-7页 |
| ABSTRACT | 第7-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 第一章 文献综述 | 第17-30页 |
| ·禽流感病毒的国内外研究进展 | 第17-24页 |
| ·禽流感病毒流行历史概况 | 第17-18页 |
| ·禽流感病毒基因组结构和作用机制 | 第18-21页 |
| ·禽流感病毒的复制 | 第21-22页 |
| ·禽流感病毒抗原变化 | 第22-23页 |
| ·禽流感病毒的感染途径和方式 | 第23-24页 |
| ·H1亚型流感病毒的研究进展 | 第24-25页 |
| ·禽流感病毒快速诊断方法的研究进展 | 第25-28页 |
| ·逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR) | 第25-26页 |
| ·二温式-聚合酶链式反应 | 第26页 |
| ·巢氏-聚合酶链式反应 | 第26-27页 |
| ·实时荧光定量-聚合酶链式反应 | 第27页 |
| ·多重-聚合酶链式反应 | 第27-28页 |
| ·本课题研究意义 | 第28-30页 |
| 第二章 H1亚型禽流感病毒的分离鉴定和生物学特性研究 | 第30-40页 |
| 摘要 | 第30页 |
| ·材料与方法 | 第30-35页 |
| ·材料 | 第30-31页 |
| ·方法 | 第31-35页 |
| ·结果 | 第35-38页 |
| ·病毒分离结果 | 第35页 |
| ·病毒纯化 | 第35-36页 |
| ·RT-PCR检测鉴定结果 | 第36页 |
| ·HA基因和NA基因测序结果 | 第36页 |
| ·H1亚型禽流感病毒病原性监测情况 | 第36-37页 |
| ·鸡胚半数致死量(ELD_(50))和鸡胚半数感染量(EID_(50))的测定结果 | 第37-38页 |
| ·致病性实验结果 | 第38页 |
| ·讨论 | 第38-40页 |
| 第三章 6株H1亚型禽流感病毒全基因序列测定与分析 | 第40-67页 |
| 摘要 | 第40页 |
| ·材料和方法 | 第40-44页 |
| ·材料 | 第40-41页 |
| ·方法 | 第41-44页 |
| ·结果 | 第44-65页 |
| ·6株分离株全基因RT-PCR扩增结果 | 第44页 |
| ·各毒株基因片段的克隆和序列测定 | 第44-48页 |
| ·6株H1N2亚型禽流感病毒全基因序列分析 | 第48-65页 |
| ·讨论 | 第65-67页 |
| 第四章 H1亚型禽流感病毒快速检测方法的建立 | 第67-104页 |
| 试验一 H1亚型禽流感病毒二温式PCR检测方法的建立 | 第67-73页 |
| 摘要 | 第67页 |
| ·材料与方法 | 第67-69页 |
| ·病毒株 | 第67页 |
| ·主要试剂 | 第67-68页 |
| ·引物设计与合成 | 第68页 |
| ·病毒RNA抽提与反转录 | 第68页 |
| ·二温式PCR条件的优化 | 第68页 |
| ·二温式PCR的特异性试验 | 第68-69页 |
| ·二温式PCR的敏感性试验 | 第69页 |
| ·临床样品检测 | 第69页 |
| ·结果 | 第69-71页 |
| ·二温式PCR反应条件的优化 | 第69页 |
| ·特异性试验结果 | 第69-70页 |
| ·敏感性试验结果 | 第70-71页 |
| ·临床样品检测结果 | 第71页 |
| ·讨论 | 第71-73页 |
| 试验二 H1亚型禽流感病毒巢氏PCR检测方法的建立 | 第73-80页 |
| 摘要 | 第73页 |
| ·材料与方法 | 第73-75页 |
| ·毒株 | 第73页 |
| ·试剂 | 第73-74页 |
| ·引物设计与合成 | 第74页 |
| ·病毒RNA的抽提与反转录 | 第74页 |
| ·巢氏PCR条件的优化 | 第74页 |
| ·巢氏PCR的特异性试验 | 第74页 |
| ·巢式PCR的敏感性试验 | 第74-75页 |
| ·结果 | 第75-77页 |
| ·巢氏PCR条件优化结果 | 第75-76页 |
| ·特异性试验结果 | 第76页 |
| ·敏感性试验结果 | 第76-77页 |
| ·讨论 | 第77-80页 |
| 试验三 H1亚型禽流感病毒实时荧光定量PCR检测方法的建立 | 第80-89页 |
| 摘要 | 第80-81页 |
| ·材料与方法 | 第81-83页 |
| ·病毒株 | 第81页 |
| ·主要设备和试剂 | 第81页 |
| ·引物的设计与合成 | 第81页 |
| ·病毒RNA抽提与反转录 | 第81页 |
| ·标准品的制备 | 第81-82页 |
| ·反应条件的优化 | 第82页 |
| ·标准曲线的制作 | 第82页 |
| ·特异性试验 | 第82-83页 |
| ·敏感性试验 | 第83页 |
| ·重复性试验 | 第83页 |
| ·临床样品检测 | 第83页 |
| ·结果 | 第83-87页 |
| ·质粒DNA浓度的测定 | 第83页 |
| ·实时荧光定量PCR条件优化 | 第83-84页 |
| ·标准曲线的制作 | 第84-85页 |
| ·敏感性试验结果 | 第85-86页 |
| ·特异性试验结果 | 第86-87页 |
| ·重复性试验结果 | 第87页 |
| ·临床检测结果 | 第87页 |
| ·讨论 | 第87-89页 |
| 试验四 H1和H3亚型禽流感病毒二重PCR检测方法的建立 | 第89-96页 |
| 摘要 | 第89页 |
| ·材料与方法 | 第89-91页 |
| ·试剂 | 第89-90页 |
| ·毒株 | 第90页 |
| ·引物设计与合成 | 第90页 |
| ·病毒RNA抽提与反转录 | 第90页 |
| ·二重PCR扩增条件的优化 | 第90页 |
| ·二重PCR的特异性试验 | 第90-91页 |
| ·二重PCR的敏感性试验 | 第91页 |
| ·临床样品检测 | 第91页 |
| ·结果 | 第91-94页 |
| ·二重PCR条件的优化 | 第91页 |
| ·特异性试验结果 | 第91-92页 |
| ·敏感性试验结果 | 第92-93页 |
| ·临床样品检测结果 | 第93-94页 |
| ·讨论 | 第94-96页 |
| 试验五 H1、H3亚型禽流感病毒和M基因三重RT-PCR检测方法的建立 | 第96-104页 |
| 摘要 | 第96页 |
| ·材料与方法 | 第96-99页 |
| ·试验材料 | 第96-97页 |
| ·引物设计与合成 | 第97页 |
| ·病毒RNA抽提与反转录 | 第97页 |
| ·阳性质粒的制备 | 第97-98页 |
| ·三重PCR扩增条件的优化 | 第98页 |
| ·三重PCR的特异性试验 | 第98页 |
| ·三重PCR的敏感性试验 | 第98页 |
| ·临床样品检测 | 第98-99页 |
| ·结果 | 第99-101页 |
| ·三重PCR条件的优化结果 | 第99-100页 |
| ·特异性试验结果 | 第100页 |
| ·敏感性试验结果 | 第100-101页 |
| ·临床样品检测结果 | 第101页 |
| ·讨论 | 第101-104页 |
| 第五章 H1亚型禽流感病毒多种快速检测方法的比较 | 第104-111页 |
| 摘要 | 第104页 |
| ·材料与方法 | 第104-107页 |
| ·病毒株 | 第104页 |
| ·RNA的抽提 | 第104-105页 |
| ·病毒RNA的梯度稀释 | 第105页 |
| ·病毒RNA浓度的测定 | 第105页 |
| ·RNA的反转录 | 第105页 |
| ·引物的合成 | 第105-106页 |
| ·六种检测方法的最佳扩增条件 | 第106-107页 |
| ·结果 | 第107-109页 |
| ·病毒RNA敏感性检测结果 | 第107-109页 |
| ·讨论 | 第109-111页 |
| 结论 | 第111-112页 |
| 参考文献 | 第112-118页 |
| 致谢 | 第118-119页 |
| 个人简历 | 第119页 |
| 攻读学位期间发表论文情况 | 第119页 |
