| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-9页 |
| 符号说明 | 第9-11页 |
| 综述 | 第11-20页 |
| 1 猪圆环病毒概述 | 第11-16页 |
| ·前言 | 第11页 |
| ·流行病学 | 第11-12页 |
| ·分子生物学研究进展 | 第12-15页 |
| ·PCV2相关疾病 | 第15-16页 |
| 2 发病机理 | 第16页 |
| 3 PCV2检测方法的研究进展 | 第16-18页 |
| ·聚合酶链式反应(PCR) | 第16-17页 |
| ·免疫胶体金技术 | 第17页 |
| ·免疫过氧化物酶单层细胞试验(IPMA) | 第17页 |
| ·间接免疫荧光技术(IFA) | 第17页 |
| ·病毒中和试验 | 第17页 |
| ·酶联免疫吸附试验(ELISA) | 第17-18页 |
| 4 PCV2疫苗的研究进展 | 第18页 |
| 5 防治 | 第18-19页 |
| 6 本研究的目的和意义 | 第19-20页 |
| 第一章 猪圆环病毒2型Cap蛋白去核定位信号肽基因的原核表达及其单克隆抗体的制备 | 第20-40页 |
| 1 材料和方法 | 第20-24页 |
| ·毒株、细胞系以及实验动物 | 第20页 |
| ·主要试剂 | 第20-21页 |
| ·主要仪器 | 第21页 |
| ·培养基及相关溶液的配制 | 第21-24页 |
| ·透析袋处理方法 | 第24页 |
| ·器械及器皿 | 第24页 |
| ·分子生物学软件 | 第24页 |
| 2 蛋白的表达及纯化 | 第24-29页 |
| ·病料的来源及处理 | 第24页 |
| ·引物设计与合成 | 第24页 |
| ·病毒DNA的提取 | 第24-25页 |
| ·重组表达载体的构建 | 第25-26页 |
| ·蛋白的表达及纯化 | 第26-27页 |
| ·表达蛋白的分析 | 第27-29页 |
| 3 单克隆抗体的制备 | 第29-32页 |
| ·动物免疫 | 第29页 |
| ·融合实验准备 | 第29-30页 |
| ·方阵的建立 | 第30页 |
| ·筛选方法 | 第30-31页 |
| ·阳性杂交瘤细胞的亚克隆 | 第31页 |
| ·杂交瘤细胞的冻存和复苏 | 第31页 |
| ·腹水的制备及特性鉴定 | 第31-32页 |
| 4 结果 | 第32-38页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第32页 |
| ·重组载体的酶切鉴定 | 第32-33页 |
| ·目的蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第33页 |
| ·纯化蛋白的SDS-PAGE鉴定 | 第33-34页 |
| ·Western-blot检测结果 | 第34页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第34-38页 |
| 5 讨论 | 第38-40页 |
| 第二章 单克隆抗体间接竞争ELISA测定PCV2抗体方法的建立与初步应用 | 第40-47页 |
| 1 试验材料及试剂 | 第40页 |
| ·阳性血清 | 第40页 |
| ·主要试剂 | 第40页 |
| ·试验器材 | 第40页 |
| 2 试验方法 | 第40-42页 |
| ·包被抗原及单抗最佳工作浓度的确定 | 第40页 |
| ·血清最佳稀释度的确定 | 第40页 |
| ·阴、阳性值判定标准的确定 | 第40-41页 |
| ·封闭液的选择 | 第41页 |
| ·竞争作用时间的确定 | 第41页 |
| ·竞争ELISA反应程序 | 第41页 |
| ·敏感性试验 | 第41页 |
| ·特异性试验 | 第41-42页 |
| ·竞争ELISA检测PCV2抗体的初步应用 | 第42页 |
| 3 实验结果 | 第42-46页 |
| ·包被抗原及酶标单抗最佳工作浓度的确定 | 第42页 |
| ·最佳封闭液的选择 | 第42-43页 |
| ·血清最佳稀释度的确定 | 第43页 |
| ·最佳竞争时间的确定 | 第43页 |
| ·阴、阳性值的判定标准 | 第43-44页 |
| ·敏感性试验结果 | 第44页 |
| ·特异性实验结果 | 第44-45页 |
| ·竞争ELISA方法的初步应用 | 第45-46页 |
| 4 讨论 | 第46-47页 |
| 全文小结 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |