| 中文摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 缩略词表 | 第7-12页 |
| 第一部分 文献综述 | 第12-22页 |
| 1 猪传染性胃肠炎研究进展 | 第12-17页 |
| ·病原学 | 第12-14页 |
| ·猪传染性胃肠炎流行病学 | 第14页 |
| ·猪传染性胃肠炎致病机制 | 第14-15页 |
| ·猪传染性胃肠炎诊断 | 第15-16页 |
| ·病毒的分离与鉴定 | 第15页 |
| ·血清学检测 | 第15-16页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒分子检测 | 第16页 |
| ·猪传染性胃肠炎疫苗与免疫预防 | 第16-17页 |
| 2 亲环素A研究进展 | 第17-22页 |
| ·亲环素A的结构与生物学功能 | 第17-19页 |
| ·亲环素A在病毒感染中的作用 | 第19-22页 |
| ·CypA与艾滋病毒的相互作用 | 第19-20页 |
| ·Cyclophilin A与流感病毒的相互作用 | 第20-21页 |
| ·Cyclophilin A与其他病毒的相互作用 | 第21-22页 |
| 目的与意义 | 第22-23页 |
| 第二部分 实验部分 | 第23-60页 |
| 第一章 猪传染性胃肠炎病毒分离鉴定与荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第23-36页 |
| 1 实验材料 | 第23-24页 |
| ·实验试剂 | 第23-24页 |
| ·菌株与细胞 | 第24页 |
| ·实验器材 | 第24页 |
| 2 实验方法 | 第24-30页 |
| ·病毒分离 | 第24页 |
| ·病毒PCR检测 | 第24-26页 |
| ·病毒液总RNA提取 | 第24-25页 |
| ·反转录制备cDNA | 第25页 |
| ·TGEV PCR检测 | 第25-26页 |
| ·其他病毒病原PCR检测 | 第26页 |
| ·病毒TCID50测定 | 第26页 |
| ·病毒中和实验 | 第26页 |
| ·病毒理化性质实验 | 第26-27页 |
| ·病毒核酸类型测定 | 第26页 |
| ·氯仿实验 | 第26-27页 |
| ·猪传染性胃肠炎病毒荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第27-30页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测引物设计 | 第27页 |
| ·标准质粒的构建 | 第27-29页 |
| ·TGEV荧光定量RT-PCR标准曲线绘制 | 第29-30页 |
| ·特异性、灵敏性、重复性实验 | 第30页 |
| 3 实验结果 | 第30-34页 |
| ·病毒培养 | 第30-31页 |
| ·病毒PCR检测 | 第31页 |
| ·病毒TCID50 | 第31页 |
| ·病毒中和实验 | 第31-32页 |
| ·病毒理化实验 | 第32页 |
| ·病毒核酸类型 | 第32页 |
| ·氯仿实验 | 第32页 |
| ·TGEV荧光定量检测方法 | 第32-34页 |
| ·标准品质粒的构建 | 第32-33页 |
| ·TGEV荧光定量RT-PCR标准曲线绘制 | 第33页 |
| ·特异性、灵敏性、重复性实验 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| ·关于TGEV病毒分离鉴定 | 第34-35页 |
| ·关于TGEV荧光定量RT-PCR检测方法的建立 | 第35-36页 |
| 第二章 猪亲环素A的克隆与原核表达 | 第36-51页 |
| 1 材料与试剂 | 第36-38页 |
| ·实验试剂 | 第36-38页 |
| ·菌株与细胞 | 第38页 |
| ·实验仪器 | 第38页 |
| 2 实验方法 | 第38-43页 |
| ·猪CypA基因PCR扩增 | 第38-40页 |
| ·引物设计 | 第38-39页 |
| ·猪外周血淋巴细胞的分离 | 第39页 |
| ·不同细胞总RNA的提取 | 第39页 |
| ·RT-PCR扩增 | 第39-40页 |
| ·猪CypA基因的克隆测序与序列分析 | 第40页 |
| ·猪CypA原核表达载体pET30-CypA的构建 | 第40-41页 |
| ·酶切消化与DNA回收 | 第40页 |
| ·连接转化与阳性克隆筛选 | 第40-41页 |
| ·猪CypA基因原核表达菌株的构建 | 第41页 |
| ·pET30-CypA原核表达菌的培养与表达 | 第41-42页 |
| ·原核表达条件的优化 | 第42页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性检测 | 第42页 |
| ·猪CypA蛋白的大量表达与纯化 | 第42-43页 |
| ·猪CypA融合表达蛋白Westernblot鉴定 | 第43页 |
| 3 实验结果 | 第43-48页 |
| ·猪CypA基因PCR扩增 | 第43-44页 |
| ·猪CypA基因遗传进化分析 | 第44-45页 |
| ·猪CypA原核表达载体构建结果 | 第45页 |
| ·pET30-CypA原核表达菌的培养与表达 | 第45-46页 |
| ·pET30-CypA原核表达条件优化 | 第46-47页 |
| ·重组表达蛋白的可溶性检测 | 第47页 |
| ·猪CypA蛋白的大量表达与纯化 | 第47-48页 |
| ·猪CypA蛋白Westernblot鉴定 | 第48页 |
| 4 讨论 | 第48-51页 |
| ·关于猪CypA蛋白克隆测序与原核表达 | 第48-50页 |
| ·关于CypA蛋白的鉴定与纯化 | 第50-51页 |
| 第三章 亲环素A对猪传染性胃肠炎病毒体外复制的影响 | 第51-60页 |
| 1 实验材料 | 第51-52页 |
| ·实验试剂 | 第51-52页 |
| ·毒株与细胞 | 第52页 |
| ·实验器材 | 第52页 |
| 2 实验方法 | 第52-55页 |
| ·猪CypA蛋白表达纯化与透析 | 第52页 |
| ·猪CypA蛋白浓度与纯度检测 | 第52-53页 |
| ·猪CypA蛋白对TGEV复制的影响 | 第53-55页 |
| ·分组处理 | 第53页 |
| ·荧光定量RT-PCR检测不同样品中TGEV含量 | 第53-55页 |
| 3 实验结果 | 第55-57页 |
| ·猪CypA蛋白纯化与透析 | 第55页 |
| ·猪CypA蛋白浓度与纯度检测 | 第55页 |
| ·猪CypA蛋白对TGEV一步生长曲线的影响 | 第55-57页 |
| 4 讨论 | 第57-60页 |
| ·关于TGEV一步生长曲线的测定 | 第57页 |
| ·关于猪CypA对TGEV体外复制影响的初步探索 | 第57-60页 |
| 结论 | 第60-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 致谢 | 第66-67页 |
| 附表 | 第67-75页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第75页 |
