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MicroRNA-302-367簇促进体细胞重编程和microRNA-145抑制肺癌细胞增殖的研究

摘要第1-9页
Abstract第9-10页
第一章 绪论第10-37页
   ·引言第10-11页
   ·microRNA简介和研究现状第11-21页
     ·microRNA的发现和命名第11-12页
     ·非编码microRNA的加工成熟第12-13页
     ·非编码microRNA的作用机制第13-14页
     ·非编码microRNA的靶点预测和验证第14-17页
     ·非编码microRNA和蛋白相互作用及其功能的调节第17-21页
   ·microRNA和疾病关系第21-29页
     ·microRNA和遗传性疾病第21-22页
     ·microRNA和病毒感染性疾病第22-24页
     ·microRNA和心血管疾病第24-26页
     ·microRNA和肿瘤第26-29页
   ·诱导多能干细胞(induced pluripotent stem cell,iPS)第29-37页
     ·诱导多能干细胞技术的发展第30页
     ·诱导多能干细胞疾病模型中的应用第30-32页
     ·诱导多能干细胞的发生的机制研究第32-34页
     ·诱导多能干细胞和胚胎干细胞的异同第34-35页
     ·microRNA,胚胎干细胞和诱导多能干细胞技术第35-37页
第二章 材料和方法第37-55页
   ·实验试剂和材料第37-40页
     ·细胞第37页
     ·主要试剂和材料第37-39页
     ·主要仪器设备第39-40页
   ·实验方法第40-55页
     ·细胞分离和培养第40页
     ·感受态的制备第40-41页
     ·质粒构建第41-42页
     ·磷酸钙和脂质体转染第42-43页
     ·多能干细胞的诱导第43页
     ·microRNA和mRNA 实时定量PCR第43-44页
     ·重编程效率的确定第44页
     ·小鼠iPS 克隆的挑取、培养和鉴定第44页
     ·内源多能性相关基因的表达激活和外源病毒的基因沉默第44-45页
     ·内源的多能性OCT4,NANOG 基因启动子区域的去甲基化第45页
     ·嵌合体鼠注射第45页
     ·DNA微阵列分析基因表达第45-46页
     ·细胞总RNA 的提取第46页
     ·逆转录和qPCR第46-47页
     ·Western blotting第47-49页
     ·免疫荧光第49-50页
     ·Celltiter-Glo检测microRNA 对细胞活性的影响第50-51页
     ·EdU 实验验证miRNA 对细胞增殖的影响第51页
     ·细胞周期检测第51页
     ·荧光素酶双报告基因法验证miRNA 靶点第51-52页
     ·BALB/c 裸鼠皮下移植瘤模型试验第52页
     ·引物列表第52-54页
     ·统计学方法计算和常用软件第54-55页
第三章 实验结果和讨论第55-88页
   ·miRNA cluster miR-302-367 促进诱导多能干细胞的研究第55-76页
     ·选择miRNA簇作为体细胞重编程的研究对象第55-57页
     ·验证miRNA在ES细胞中和MEF细胞中表达差异第57页
     ·miRNA cluster A ,B,C成员的种子序列第57-58页
     ·miRNA cluster A ,B,C的过表达第58-59页
     ·microRNA簇B,C可以促进体细胞重编程效率第59-61页
     ·体细胞重编程获得的诱导多能干细胞的体外鉴定第61-63页
     ·体细胞重编程获得的诱导多能干细胞的体内鉴定第63-65页
     ·Yamanaka因子参与诱导miRNA cluster成员表达第65-66页
     ·miRNA簇中各个成员功能的验证第66-67页
     ·miR-106a-363 和miR-302-367 在诱导过程中引起的基因变化第67-69页
     ·Tgfbr2 是MiR-302 的靶点第69-70页
     ·miR-302-367 促进了MET的过程第70-71页
     ·miR-302-367 促进人的体细胞编程第71-72页
     ·Yamanaka因子在人体细胞重编程过程中调节miRNA簇成员表达第72-73页
     ·讨论和结论第73-76页
   ·miR-145 抑制肺癌细胞的增殖研究第76-88页
     ·miR-145 对于肺癌细胞增殖的影响第76-80页
     ·miR-145 对于肺癌细胞增殖的抑制是通过影响细胞周期引起的第80-82页
     ·CDK6 是miR-145 的作用靶点第82-84页
     ·miR-145 抑制体内移植瘤的生长第84-86页
     ·讨论和结论第86-88页
参考文献第88-104页
致谢第104-105页
再读期间发表的论文和研究成果第105-106页

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