| 摘要 | 第1-5页 |
| Abstract | 第5-11页 |
| 缩略表 | 第11-13页 |
| 第一章 绪论 | 第13-23页 |
| 1 BCRP/ABCG2的发现 | 第13-14页 |
| 2 BCRP的结构与功能 | 第14-15页 |
| 3 BCRP的组织分布及在药物代谢中的作用 | 第15-17页 |
| 4 BCRP的转运底物 | 第17页 |
| ·外源性底物 | 第17页 |
| ·内源性底物 | 第17页 |
| 5 BCRP的抑制剂 | 第17-20页 |
| ·BCRP特异性抑制剂 | 第17-18页 |
| ·ABC转运蛋白家族的广谱特异性抑制剂 | 第18页 |
| ·酪氨酸激酶抑制剂（The Tyrosine kinase inhibitors，TKIs） | 第18-19页 |
| ·BCRP的黄酮类化合物及其衍生物抑制剂 | 第19-20页 |
| 6 BCRP对干细胞增值和分化的影响 | 第20页 |
| 7 展望 | 第20-21页 |
| 8 本课题研究目的和意义 | 第21-23页 |
| 第二章 BCRP乳腺癌稳定高表达细胞株MCF-7/BCRP的构建及鉴定 | 第23-44页 |
| 1 前言 | 第23-24页 |
| 2 实验材料、试剂和仪器 | 第24-27页 |
| ·实验材料 | 第24页 |
| ·实验试剂 | 第24-25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·相关溶液配置 | 第26-27页 |
| 3 实验方法 | 第27-37页 |
| ·BCRP表达载体pLJM1/bcrp的构建 | 第27-33页 |
| ·引物设计 | 第27页 |
| ·目的片段bcrp的PCR扩增 | 第27-28页 |
| ·PCR产物试剂盒回收 | 第28页 |
| ·质粒pLJM1的提取 | 第28-29页 |
| ·双酶切 | 第29页 |
| ·酶切产物回收 | 第29-30页 |
| ·T4链接酶连接 | 第30页 |
| ·感受态制备 | 第30页 |
| ·转化 | 第30-31页 |
| ·菌落PCR及双酶切鉴定 | 第31-32页 |
| ·双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·测序鉴定 | 第32页 |
| ·碱裂解法大量抽提pLJM1/bcrp以及pLJM1、PsPAX2、PMD2.G | 第32-33页 |
| ·BCRP乳腺癌稳定高表达细胞株MCF-7/BCRP的构建 | 第33-37页 |
| ·293T、MCF-7细胞培养 | 第33页 |
| ·病毒包装 | 第33-34页 |
| ·病毒侵染及稳定株的筛选 | 第34页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第34-35页 |
| ·cDNA的制备 | 第35页 |
| ·半定量RT-PCR鉴定BCRP高表达 | 第35-36页 |
| ·Western-blot | 第36-37页 |
| 4 结果 | 第37-42页 |
| ·重组表达载体载体pLJM1/bcrp的构建结果 | 第37-40页 |
| ·PCR扩增 | 第37页 |
| ·目的片段bcrp和载体pLJM1双酶切 | 第37-38页 |
| ·重组质粒pLJM1/bcrp的菌落PCR鉴定 | 第38-39页 |
| ·重组质粒pLJM1/bcrp的双酶切鉴定结果 | 第39-40页 |
| ·测序鉴定结果 | 第40页 |
| ·MCF-7/BCRP高表达细胞株的构建结果 | 第40-42页 |
| ·pLJM1与包装质粒共转染293T细胞 | 第40页 |
| ·筛选得到稳定高表达的细胞株MCF-7/BCRP | 第40-41页 |
| ·Western-blot | 第41页 |
| ·半定量RT-PCR | 第41-42页 |
| 5 讨论 | 第42-44页 |
| 第三章 BCRP人肾细胞稳定高表达细胞株293T/BCRP的构建及鉴定 | 第44-56页 |
| 1 前言 | 第44-45页 |
| 2 实验材料、试剂和仪器 | 第45页 |
| 3 实验方法 | 第45-50页 |
| ·BCRP表达载体M78-S1/bcrp的构建 | 第45-48页 |
| ·引物设计 | 第45页 |
| ·目的片段bcrp的PCR扩增 | 第45页 |
| ·PCR产物试剂盒回收 | 第45页 |
| ·质粒M78-S1的提取 | 第45页 |
| ·双酶切 | 第45-46页 |
| ·酶切产物回收 | 第46页 |
| ·T4链接酶连接 | 第46页 |
| ·转化 | 第46-47页 |
| ·菌落PCR鉴定 | 第47页 |
| ·双酶切鉴定 | 第47-48页 |
| ·测序鉴定 | 第48页 |
| ·碱裂解法大量抽提M78-S1/bcrp以及M78-S1、EGFP质粒 | 第48页 |
| ·BCRP人肾细胞稳定高表达细胞株293T/BCRP的构建 | 第48-50页 |
| ·293T细胞培养 | 第48页 |
| ·293T细胞瞬时转染 | 第48-49页 |
| ·Western-blot | 第49页 |
| ·BCRP人肾细胞稳定高表达细胞株293T/BCRP的构建 | 第49页 |
| ·细胞总RNA的提取 | 第49页 |
| ·cDNA的制备 | 第49页 |
| ·半定量RT-PCR鉴定 | 第49-50页 |
| ·Western-blot | 第50页 |
| 4 结果 | 第50-55页 |
| ·M78-S1重组表达载体构建结果 | 第50-53页 |
| ·双酶切 | 第50-51页 |
| ·重组质粒M78-S1/bcrp的菌落PCR鉴定 | 第51-52页 |
| ·重组质粒M78-S1/bcrp的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·测序鉴定结果 | 第53页 |
| ·BCRP稳定高表达细胞株293T/BCRP的构建 | 第53-55页 |
| ·EGFP转染293T实验结果 | 第53页 |
| ·Western-blot检测BCRP瞬转结果 | 第53-54页 |
| ·Western-blot检测BCRP高表达细胞株293T/BCRP | 第54页 |
| ·半定量RT-PCR | 第54-55页 |
| 5 讨论 | 第55-56页 |
| 第四章 BCRP外排功能及黄酮类化合物逆转耐药性研究 | 第56-64页 |
| 1 前言 | 第56-57页 |
| 2 实验材料、试剂和仪器 | 第57-58页 |
| ·实验材料 | 第57页 |
| ·实验试剂 | 第57-58页 |
| ·主要仪器 | 第58页 |
| ·相关溶液配置 | 第58页 |
| 3 实验方法 | 第58-59页 |
| ·MTT比色法检测BCRP高表达细胞株对阿霉素、罗丹明123敏感性影响 | 第58-59页 |
| ·细胞培养和药物制备 | 第58页 |
| ·MTT比色法测定加入阿霉素、罗丹明123后细胞增殖情况 | 第58-59页 |
| ·MTT比色法测定加入阿霉素以及黄酮类化合物后的细胞活力情况 | 第59页 |
| 4 结果 | 第59-63页 |
| ·MTT比色法测定加入阿霉素和罗丹明123后细胞增殖结果 | 第59-60页 |
| ·MTT比色法测定加入阿霉素以及黄酮类化合物后细胞活力结果 | 第60-63页 |
| 5 讨论 | 第63-64页 |
| 第五章 结论与展望 | 第64-66页 |
| 1 结论 | 第64页 |
| 2 展望 | 第64-66页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 致谢 | 第70页 |
