| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-24页 |
| ·莱茵衣藻的研究概况 | 第11-14页 |
| ·莱茵衣藻的分类地位及其细胞结构 | 第11页 |
| ·莱茵衣藻的生活史 | 第11-12页 |
| ·莱茵衣藻是一种很重要的模式生物 | 第12-13页 |
| ·莱茵衣藻作为研究叶绿体及光合作用的材料 | 第12页 |
| ·莱茵衣藻作为研究鞭毛和基体的材料 | 第12-13页 |
| ·莱茵衣藻外源基因的转化方法 | 第13-14页 |
| ·基因枪法 | 第13页 |
| ·玻璃珠法 | 第13页 |
| ·电击法 | 第13-14页 |
| ·基因功能研究方法概况 | 第14-18页 |
| ·基因转导技术 | 第14页 |
| ·反义技术 | 第14-15页 |
| ·基因敲除(Gene knockout)与敲入(Gene knockin) | 第15页 |
| ·RNA干扰技术(RNA interference,RNAi) | 第15-18页 |
| ·MicroRNA的形成及作用机制 | 第16-17页 |
| ·siRNA与miRNA的比较 | 第17-18页 |
| ·植物miRNA的生物学功能 | 第18页 |
| ·生物柴油的研究概况 | 第18-20页 |
| ·生物柴油概况 | 第18-19页 |
| ·微藻产油的行业现状 | 第19-20页 |
| ·微藻产油的优点 | 第19-20页 |
| ·微藻产油面临的问题 | 第20页 |
| ·莱茵衣藻淀粉代谢途径与油脂合成关系的研究概况 | 第20-22页 |
| ·本文的研究目的和意义 | 第22-24页 |
| 第二部分 材料与方法 | 第24-37页 |
| ·实验材料 | 第24-28页 |
| ·供试菌株 | 第24页 |
| ·供试质粒 | 第24-25页 |
| ·植物材料 | 第25页 |
| ·培养基 | 第25-26页 |
| ·酶、试剂和材料 | 第26页 |
| ·仪器和设备 | 第26-27页 |
| ·主要缓冲液和抗生素的配制 | 第27页 |
| ·引物 | 第27-28页 |
| ·实验方法 | 第28-37页 |
| ·普通PCR扩增 | 第28-29页 |
| ·DNA胶回收 | 第29页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞的制备(TB法) | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌的常规转化 | 第30页 |
| ·大肠杆菌的快速转化 | 第30页 |
| ·质粒DNA的抽提及纯化(碱裂解法) | 第30-31页 |
| ·细菌接合转移(MAGIC)实验 | 第31-32页 |
| ·莱茵衣藻的培养 | 第32页 |
| ·莱茵衣藻的遗传转化(玻璃珠震荡法) | 第32-33页 |
| ·衣藻总DNA的提取 | 第33页 |
| ·衣藻总RNA的提取(Trizol试剂法) | 第33-34页 |
| ·cDNA第一条链的反转录合成 | 第34页 |
| ·荧光实时定量PCR | 第34-35页 |
| ·尼罗红染色荧光分光光度法快速检测莱茵衣藻中性脂相对含量 | 第35页 |
| ·淀粉试剂盒检测莱茵衣藻中淀粉含量 | 第35-37页 |
| 第三部分 结果与分析 | 第37-46页 |
| ·amiRNA表达载体的构建 | 第37-40页 |
| ·供体载体pRTK-STA6、pRTK-SSS2和pRTK-AMYB1的构建 | 第37-39页 |
| ·表达载体的构建 | 第39-40页 |
| ·转基因藻株的获得 | 第40-41页 |
| ·莱茵衣藻的遗传转化 | 第40-41页 |
| ·莱茵衣藻转化子的鉴定 | 第41页 |
| ·转基因藻的干扰效果分析 | 第41-43页 |
| ·尼罗红染色法定量测定中性脂含量 | 第43-44页 |
| ·转基因藻中的淀粉含量的测定 | 第44-46页 |
| 第四部分 讨论与展望 | 第46-48页 |
| ·讨论 | 第46-47页 |
| ·MicroRNA在转基因藻中的干扰效果 | 第46页 |
| ·STA6,SSS2基因沉默对莱茵衣藻淀粉含量及油脂积累的影响 | 第46页 |
| ·AMYB1基因沉默对莱茵衣藻淀粉含量及油脂积累的影响 | 第46-47页 |
| ·展望 | 第47-48页 |
| 附录：重组质粒干扰单元及终止子序列测序结果 | 第48-50页 |
| 参考文献 | 第50-56页 |
| 致谢 | 第56页 |
