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利用RNAi技术控制褐飞虱的研究

致谢第1-10页
摘要第10-11页
Abstract第11-12页
1 献综述第12-30页
   ·褐飞虱概述和危害及其防治第12-17页
     ·褐飞虱生物学特征第12-13页
     ·褐飞虱的取食第13-14页
     ·褐飞虱的危害第14-15页
     ·褐飞虱的防治第15-17页
       ·农业防治第15页
       ·生物防治第15-16页
       ·物理防治第16页
       ·化学防治第16-17页
       ·抗性品种的选育第17页
   ·RNA干扰技术第17-22页
     ·RNAi的发现第17-18页
     ·RNAi的作用机制第18-20页
     ·RNAi的系统性第20-21页
     ·RNAi的作用特点第21-22页
   ·RNAi在昆虫中的研究第22-25页
     ·昆虫吸收dsRNA的机制第22-23页
     ·RNAi防治害虫的优势第23页
     ·RNAi技术防治害虫的实施方法第23-25页
       ·注射法第23-24页
       ·饲喂法第24-25页
       ·转基因植物法第25页
     ·RNAi在害虫控制中的应用第25页
   ·转基因抗虫作物第25-27页
   ·四种基因的概述及其筛选第27-30页
     ·四种基因功能概述第27-29页
       ·阳离子氨基酸转运蛋白(Cationic Amino Acid Transporter,CAT)第27-28页
       ·己糖转运蛋白(hexosetransporter)第28页
       ·核糖体蛋白(Ribosomal protein,RP)第28-29页
     ·基因筛选第29-30页
2 材料与方法第30-48页
   ·材料第30-31页
     ·供试昆虫第30页
     ·实验菌株第30页
     ·植物材料第30页
     ·质粒载体第30页
     ·主要酶类及试剂盒第30页
     ·其他试剂第30页
     ·主要仪器第30-31页
   ·方法第31-48页
     ·分子生物学实验方法第31-38页
       ·质粒提取第31-32页
       ·PrimeStar扩增的PCR反应第32页
       ·琼脂糖凝胶电泳第32-33页
       ·凝胶回收第33-34页
       ·高保真酶扩增产物加A反应第34页
       ·连接反应第34-35页
       ·大肠杆菌TG1感受态细胞的制备及转化第35-36页
       ·根瘤土壤农杆菌(LBA4404)感受态细胞的制备及转化第36-37页
       ·酶切反应第37页
       ·褐飞虱cDNA的合成第37-38页
     ·农杆菌介导的外源基因的转化第38-40页
       ·水稻成熟胚愈伤组织的诱导第38页
       ·农杆菌与水稻愈伤的共培养第38-39页
       ·抗性愈伤组织的筛选第39-40页
       ·转化植株的再生与培养第40页
     ·转基因干扰载体的构建第40-42页
       ·干扰基因的选择第40页
       ·干扰载体的组成第40-41页
       ·干扰载体的构建第41-42页
     ·外源基因转化水稻第42页
     ·转基因水稻的Western Blot分析第42-44页
       ·Trizol法提取植物组织蛋白质第42-43页
       ·Western blot第43-44页
     ·转基因水稻的Northern blot分析第44-46页
       ·Trizol法提取植物总RNA第44-45页
       ·Northern blot第45-46页
     ·转基因水稻的抗性分析第46-48页
       ·温室水培阶段抗性分析第46-47页
       ·转基因水稻的抗褐飞虱效果检测第47-48页
3 结果与分析第48-57页
   ·转基因载体的鉴定第48-50页
     ·干扰长片段(Long,L)和短片段(Short,S)的扩增第48页
     ·干扰片段pGEM-T Easy载体的构建第48-49页
     ·干扰表达载体的构建第49-50页
   ·转基因水稻植株的获得第50-51页
   ·转基因水稻的鉴定第51-57页
     ·转基因水稻Western blot分析第51-52页
     ·转基因水稻Northern blot分析第52-53页
     ·转基因水稻的抗性分析第53-57页
       ·温室水培阶段抗性分析第53-54页
       ·转基因水稻的抗褐飞虱效果检测第54-57页
4. 讨论第57-59页
参考文献第59-66页
作者简历第66-67页
附录Ⅰ 常用的生化试剂及仪器第67-69页
附录Ⅱ 常用的实验溶液配置方法第69-74页

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