| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-8页 |
| 目录 | 第8-12页 |
| 绪论 | 第12-14页 |
| 第1章 文献综述 | 第14-25页 |
| ·绵羊肺炎支原体的分类地位与生物学特性 | 第14-16页 |
| ·分类地位 | 第14-15页 |
| ·形态结构 | 第15页 |
| ·培养特性 | 第15-16页 |
| ·肺炎支原体的流行病学调查 | 第16-17页 |
| ·绵羊肺炎支原体的感染症状 | 第17-18页 |
| ·临床症状 | 第17页 |
| ·组织学变化 | 第17-18页 |
| ·绵羊肺炎支原体致病机理 | 第18-21页 |
| ·基因分型研究 | 第18-19页 |
| ·致病机理研究 | 第19-21页 |
| ·绵羊肺炎支原体诊断技术 | 第21-22页 |
| ·病原学培养诊断 | 第21页 |
| ·血清学检测 | 第21页 |
| ·抗原检测 | 第21-22页 |
| ·基因诊断技术 | 第22页 |
| ·防治措施 | 第22-25页 |
| ·化学药物治疗 | 第22-23页 |
| ·疫苗防治 | 第23-24页 |
| ·微生态制剂防治 | 第24-25页 |
| 第2章 绵羊肺炎支原体 P30 基因与 IFNγ基因融合表达质粒构建及其在大肠杆菌中的表达 | 第25-39页 |
| 摘要 | 第25页 |
| ·材料 | 第25-26页 |
| ·菌株 | 第25页 |
| ·载体及引物 | 第25页 |
| ·试剂 | 第25-26页 |
| ·主要仪器设备 | 第26页 |
| ·方法 | 第26-35页 |
| ·引物设计 | 第26页 |
| ·绵羊肺炎支原体 P30 目的基因扩增 | 第26-28页 |
| ·IFNγ目的基因扩增 | 第28-29页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第29页 |
| ·PCR 产物回收 | 第29-30页 |
| ·大肠杆菌感受态细胞制备 | 第30-31页 |
| ·P30 和 IFNγ基因与克隆载体连接 | 第31页 |
| ·转化及筛选 | 第31页 |
| ·重组质粒的小量提取 | 第31-32页 |
| ·重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第32页 |
| ·P30 与 IFNγ基因测序与同源性比对 | 第32页 |
| ·P30 和 IFNγ目的基因以及表达载体的双酶切 | 第32页 |
| ·酶切后目的片段及载体的回收和连接 | 第32页 |
| ·阳性重组子的筛选和鉴定 | 第32-33页 |
| ·融合质粒 pET-P30-IFNγ的构建 | 第33页 |
| ·重组菌株的诱导表达与超声破碎 | 第33页 |
| ·蛋白样制备 | 第33-34页 |
| ·表达产物的 SDS-PAGE 分析 | 第34页 |
| ·表达产物的 Western blot 分析 | 第34-35页 |
| ·结果与分析 | 第35-38页 |
| ·小鼠总 RNA 检测 | 第35页 |
| ·P30 与 IFNγ目的基因扩增 | 第35-36页 |
| ·重组克隆质粒双酶切鉴定 | 第36页 |
| ·P30 与 IFNγ基因序列分析 | 第36页 |
| ·重组表达质粒双酶切鉴定 | 第36页 |
| ·表达产物的在大肠杆菌中的分布 | 第36-38页 |
| ·表达产物的 Western blot 分析 | 第38页 |
| ·小结 | 第38-39页 |
| 第3章 融合蛋白疫苗的免疫原性研究 | 第39-48页 |
| 摘要 | 第39页 |
| ·材料 | 第39页 |
| ·菌种 | 第39页 |
| ·试剂 | 第39页 |
| ·供试动物 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-43页 |
| ·基因工程疫苗的制备 | 第39-40页 |
| ·疫苗安全性检测 | 第40页 |
| ·小鼠攻毒剂量的测定 | 第40-41页 |
| ·动物免疫试验 | 第41页 |
| ·P30 抗体的间接 ELISA 检测 | 第41-42页 |
| ·P30 抗体的 Western blot 分析 | 第42页 |
| ·肺组织冰冻切片制作 | 第42-43页 |
| ·结果与分析 | 第43-46页 |
| ·疫苗安全性检测 | 第43页 |
| ·小鼠攻毒剂量测定 | 第43页 |
| ·疫苗保护效果 | 第43-44页 |
| ·P30 抗体的间接 ELISA 检测 | 第44页 |
| ·P30 抗体的 Western blot 分析 | 第44-46页 |
| ·肺组织冰冻切片 | 第46页 |
| ·小结 | 第46-48页 |
| 第4章 绵羊肺炎支原体 P30 基因真核表达载体的构建及其在烟草中的瞬时表达 | 第48-56页 |
| 摘要 | 第48页 |
| ·材料 | 第48-49页 |
| ·菌株 | 第48页 |
| ·载体及引物 | 第48页 |
| ·试剂 | 第48页 |
| ·烟草植株 | 第48-49页 |
| ·方法 | 第49-51页 |
| ·P30 目的基因的 PCR 扩增 | 第49页 |
| ·P30 基因真核表达质粒 pCAMBIA1300-P30-YFP 的构建 | 第49页 |
| ·农杆菌感受态细胞制备 | 第49-50页 |
| ·重组表达载体转化农杆菌受体细胞 | 第50页 |
| ·侵染烟草叶片 | 第50页 |
| ·P30 目的蛋白亚细胞定位 | 第50页 |
| ·表达产物的 Western blot 分析 | 第50页 |
| ·目的基因的 RT-PCR 检测 | 第50-51页 |
| ·结果与分析 | 第51-55页 |
| ·P30 目的基因的 PCR 扩增 | 第51页 |
| ·重组克隆质粒 pMD-P30 双酶切鉴定 | 第51页 |
| ·P30 基因序列分析 | 第51-52页 |
| ·重组表达质粒 pCAMBIA1300-P30-YFP 的双酶切鉴定 | 第52-53页 |
| ·P30-YFP 融合蛋白亚细胞定位 | 第53页 |
| ·表达产物的 Western blot 分析 | 第53-54页 |
| ·P30 基因的 RT-PCR 检测 | 第54-55页 |
| ·小结 | 第55-56页 |
| 讨论 | 第56-59页 |
| 结论 | 第59-61页 |
| 参考文献 | 第61-66页 |
| 附录 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
| 攻读学位期间取得的科研成果清单 | 第68页 |
