| 中文摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-12页 |
| 材料与方法 | 第12-35页 |
| 一、实验材料 | 第12-21页 |
| 1. 基因芯片、工具酶及分子量Marker | 第12页 |
| 2. 主要生化试剂 | 第12-13页 |
| 3. 试剂盒 | 第13页 |
| 4. 培养基、血清及添加剂 | 第13页 |
| 5. 同位素标记化合物 | 第13页 |
| 6. 菌株 | 第13-14页 |
| 7. 质粒 | 第14-17页 |
| 8. 细胞系 | 第17页 |
| 9. 胆管癌组织标本 | 第17-18页 |
| 10. 引物 | 第18-19页 |
| 11. Northern杂交探针 | 第19页 |
| 12. 特异针对PTEN、PDCD4和RECK的siRNA序列 | 第19页 |
| 13. 生物信息学分析软件 | 第19-20页 |
| 14. 主要仪器及设备 | 第20-21页 |
| 二、实验方法 | 第21-35页 |
| 1. 细胞学实验 | 第21-24页 |
| ·细胞培养 | 第21-22页 |
| ·细胞转染(按Effectene转染试剂盒操作手册进行) | 第22-23页 |
| ·细胞增殖检测 | 第23页 |
| ·细胞凋亡分析 | 第23页 |
| ·细胞体外侵袭实验 | 第23-24页 |
| 2. Real-time PCR | 第24-26页 |
| ·Trizol法提取细胞总 RNA | 第24-25页 |
| ·RNA质量的检测 | 第25页 |
| ·M-MLV合成cDNA第一链 | 第25-26页 |
| ·Real-time PCR | 第26页 |
| 3. miRNA的PAGE及Northern杂交 | 第26-28页 |
| ·细胞及组织总RNA的制备 | 第26-27页 |
| ·末端标记法标记探针 | 第27页 |
| ·miRNA的PAGE电泳、电转膜、杂交及放射自显影 | 第27-28页 |
| 4. 重组质粒的构建 | 第28-29页 |
| 5. 质粒DNA的提取 | 第29-31页 |
| ·质粒DNA的小量提取和定量 | 第29-30页 |
| ·质粒DNA的大量制备及纯化 | 第30-31页 |
| 6. 流式细胞仪(FACS)分析膜蛋白表达 | 第31页 |
| 7. Western blot | 第31-33页 |
| ·蛋白的提取及定量 | 第31页 |
| ·蛋白的SDS-PAGE电泳 | 第31-32页 |
| ·蛋白的电转移 | 第32页 |
| ·杂交 | 第32-33页 |
| ·二次免疫印迹 | 第33页 |
| 8. 双荧光素酶报告基因实验 | 第33-34页 |
| 9. 实验研究方案 | 第34-35页 |
| 结果 | 第35-55页 |
| 一、miRNAs在胆管癌组织及细胞系QBC939中的表达及初步的功能研究 | 第35-47页 |
| 1. 肝内及肝外胆管癌表达上调的miRNAs | 第35-40页 |
| ·肝外胆管癌表达上调的miRNAs | 第35-37页 |
| ·肝内胆管癌表达上调的miRNAs | 第37-38页 |
| ·肝外及肝内胆管癌共同表达上调的miRNAs | 第38-40页 |
| 2. 肝内及肝外胆管癌表达下调的miRNAs | 第40-46页 |
| ·肝外胆管癌表达下调的miRNAs | 第40-42页 |
| ·肝内胆管癌表达下调的miRNAs | 第42-44页 |
| ·肝外及肝内胆管癌共同表达下调的miRNAs | 第44-46页 |
| 3. miRNAs在胆管癌细胞系QBC939中初步的功能研究 | 第46-47页 |
| ·敲低内源性miR-125b、miR-19a、miR-21与miR-378*的表达可以有效抑制QBC939细胞增殖 | 第46-47页 |
| ·利用miRNAs mimics过表达miR-596、miR-181a、miR-492与miR-602可以有效抑制QBC939细胞增殖 | 第47页 |
| 二、.miR-21在胆管癌发生过程中的功能研究 | 第47-55页 |
| 1. miR-21在胆管癌组织及胆管癌细胞系QBC939中表达及对QBC939细胞表型的影响 | 第47-49页 |
| ·miR-21在胆管癌组织及细胞系QBC939中表达上调 | 第47-48页 |
| ·敲低miR-21表达水平抑制QBC939细胞增殖并促进细胞凋亡 | 第48-49页 |
| 2. miR-21在胆管癌发生及发展过程中的作用机制研究 | 第49-55页 |
| ·PTEN、PDCD4是miR-21在胆管癌细胞中的靶基因 | 第49-52页 |
| ·RECK是miR-21在胆管癌细胞中的靶基因 | 第52-54页 |
| ·miR-21通过调控RECK在胆管癌发生过程中所发挥的功能研究 | 第54-55页 |
| 讨论 | 第55-58页 |
| 小结 | 第58-59页 |
| 参考文献 | 第59-63页 |
| 文献综述一 | 第63-70页 |
| 参考文献 | 第66-70页 |
| 文献综述二 | 第70-76页 |
| 参考文献 | 第73-76页 |
| 英文名词与书写 | 第76-78页 |
| 攻读硕士期间发表和待发表的文章 | 第78-79页 |
| 致谢 | 第79-80页 |
