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家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达调控研究

中文摘要第1-6页
Abstract第6-13页
引言第13-15页
第一章 文献综述第15-41页
   ·蜕皮激素第15-17页
     ·蜕皮激素的种类及功能第15-16页
     ·蜕皮激素滴度的周期性变化第16页
     ·蜕皮激素的合成第16-17页
     ·蜕皮激素的分解代谢第17页
   ·蜕皮激素受体和超气门蛋白第17-25页
     ·EcR 和 USP 的结构第17-20页
     ·蜕皮激素与 EcR 作用机理的研究进展第20-22页
     ·EcR/USP 与蜕皮激素信号转导第22-23页
     ·EcR 和 USP 在蜕皮与变态发育中的作用第23页
     ·研究昆虫 EcR 和 USP 的意义第23-24页
     ·EcR 和 USP 的研究前景第24-25页
   ·实时荧光定量 PCR(Real-time qPCR)技术第25-29页
     ·原理第25-27页
     ·Real-time qPCR 的定量方法第27-28页
     ·实时荧光定量 PCR 技术的应用第28-29页
     ·存在的问题及应用前景第29页
   ·Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统第29-32页
     ·杆状病毒第29-30页
     ·Bac-to-Bac 杆状病毒表达系统的原理第30-32页
   ·双荧光报告基因分析系统[87]第32-34页
   ·基因表达调控及启动子研究进展第34-41页
     ·基因表达调控的相关研究第34-37页
     ·启动子及其研究进展第37-38页
     ·启动子的研究第38-39页
     ·昆虫启动子研究进展第39-41页
第二章 材料和方法第41-54页
   ·家蚕品种及饲养第41页
   ·菌株、病毒、质粒和细胞系第41页
   ·常用试剂和缓冲液第41-43页
     ·常用分子生物学试剂第41页
     ·LB 培养基(Luria–Bertani 培养基)第41页
     ·抗生素储备液第41-42页
     ·X-gal第42页
     ·IPTG第42页
     ·蓝白斑筛选平板第42页
     ·缓冲液和常用溶液第42-43页
   ·实验方法第43-54页
     ·家蚕基因组 DNA 的提取第43-44页
     ·组织总 RNA 的抽提第44页
     ·反转录第44页
     ·常规 PCR 反应第44-45页
     ·琼脂糖凝胶中回收 DNA 片段第45页
     ·DNA 片段的连接反应第45页
     ·酶切反应第45页
     ·连接产物的转化第45页
     ·测序和 DNA 合成第45页
     ·合成 DNA 片段的退火第45-46页
     ·质粒 DNA 少量快速提取—碱法第46页
     ·大肠杆菌 TOP10 感受态细胞的制备第46页
     ·DH10Bac 感受态细胞的制备:第46-47页
     ·重组 Bacmid 的产生第47-49页
     ·昆虫细胞的培养第49-50页
     ·Bacmid 转染 Sf9 培养细胞第50页
     ·病毒的大量扩增第50页
     ·大量扩增病毒的纯化第50-51页
     ·病毒滴度的测定第51-52页
     ·病毒的接种第52页
     ·在细胞水平测荧光强度第52页
     ·家蚕组织解剖及样品处理第52-53页
     ·RNA 抽提和体外逆转录第53页
     ·实时定量 PCR(Real-time PCR)第53-54页
第三章 蜕皮激素诱导家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的表达变化第54-66页
 摘要第54页
   ·引言第54页
   ·材料与方法第54-56页
     ·材料及主要试剂第54-55页
     ·方法第55-56页
   ·结果与分析第56-64页
     ·蜕皮激素诱导后 BmEcR-A 和 BmEcR-B1 基因在家蚕 5 龄幼虫不同组织中的转录活性变化第56-60页
     ·蜕皮激素诱导后 BmUSP 基因在家蚕 5 龄幼虫不同组织中的转录活性变化第60-62页
     ·家蚕 4 龄眠蚕到 5 龄第 8 天 BmEcR-A、BmEcR-B1 和 BmUSP 基因在不同组织中的转录活性变化第62-64页
   ·讨论第64-66页
第四章 蜕皮激素受体和超气门蛋白基因启动子的活性分析第66-84页
 摘要第66页
   ·引言第66-67页
   ·材料与方法第67-73页
     ·材料第67-68页
     ·实验方法第68-73页
   ·结果与分析第73-82页
     ·BmEcR-A、BmEcR-B1 和 BmUSP 基因启动子各片段的 TA 克隆结果第73-74页
     ·重组转移载体质粒的构建第74-76页
     ·BmEcR-A、BmEcR-B1 和 BmUSP 基因启动子活性分析第76-82页
   ·讨论第82-84页
结论第84-86页
参考文献第86-97页
攻读学位期间发表的论文第97-98页
致谢第98-99页

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