| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-20页 |
| 第一章 绪论 | 第20-38页 |
| 1 间质干细胞与肿瘤生长 | 第20-23页 |
| ·MSCs的生物学特性 | 第20页 |
| ·干细胞与肿瘤细胞的共同点 | 第20-21页 |
| ·间质干细胞可突变为肿瘤细胞 | 第21-22页 |
| ·间质干细胞体内外对肿瘤细胞生长的作用 | 第22-23页 |
| 2 MSCs与肿瘤微环境 | 第23-30页 |
| ·MSCs参与肿瘤微环境形成 | 第23-24页 |
| ·MSCs向肿瘤组织的趋化性 | 第24-25页 |
| ·MSCs与肿瘤微环境中血管的生成 | 第25-28页 |
| ·肿瘤血管的生成机制 | 第25-27页 |
| ·MSCs在肿瘤微环境中血管生成中的作用 | 第27-28页 |
| ·MSC与肿瘤相关成纤维母细胞(TAF) | 第28-30页 |
| 3 MSCs与肿瘤干细胞 | 第30-33页 |
| ·肿瘤干细胞微环境的产生 | 第31页 |
| ·MSCs在肿瘤干细胞微环境中的作用 | 第31-32页 |
| ·肿瘤细胞对间质干细胞生长的作用 | 第32-33页 |
| 4 MSCs与肿瘤靶向治疗 | 第33-36页 |
| ·骨髓细胞在肿瘤靶向治疗中的作用 | 第33-34页 |
| ·MSCs在肿瘤靶向治疗中的作用 | 第34-36页 |
| 5. 本论文研究目的、方法、技术路线、预期结果及意义 | 第36-38页 |
| ·研究目的 | 第36页 |
| ·研究方法 | 第36页 |
| ·技术路线 | 第36-37页 |
| ·预期结果及意义 | 第37-38页 |
| 第二章 骨髓MSC通过旁分泌途径活化肿瘤细胞促进肿瘤发生 | 第38-60页 |
| ·材料 | 第38-39页 |
| ·细胞株及实验动物 | 第38页 |
| ·主要试剂 | 第38-39页 |
| ·主要仪器 | 第39页 |
| ·方法 | 第39-45页 |
| ·细胞培养 | 第39-40页 |
| ·裸鼠致瘤模型建立 | 第40页 |
| ·病理分析 | 第40页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第40-41页 |
| ·总RNA提取和逆转录 | 第41页 |
| ·PCR扩增 | 第41-42页 |
| ·定量PCR反应 | 第42页 |
| ·核磁共振检测 | 第42页 |
| ·鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成试验 | 第42-43页 |
| ·MTT细胞增殖试验 | 第43页 |
| ·VEGF ELISA检测 | 第43页 |
| ·RhoA活性检测 按Chen等方法操作 | 第43-44页 |
| ·Western-blot | 第44页 |
| ·基因芯片分析 | 第44-45页 |
| ·Transwell迁移实验 | 第45页 |
| ·统计学分析 | 第45页 |
| ·结果 | 第45-57页 |
| ·MSC-CM体外预处理肿瘤细胞有效促进裸鼠体内肿瘤快速生长 | 第45-46页 |
| ·MSC体外对肿瘤细胞的增殖作用 | 第46页 |
| ·MSC-CM预处理的SGC-7901细胞瘤组织血管密度增加 | 第46页 |
| ·MSC分泌的信号分子直接活化肿瘤细胞的血管形成 | 第46-50页 |
| ·MSC-CM作用SGC-7901细胞后基因表达改变 | 第50-55页 |
| ·MSC-CM诱导SGC-7901细胞VEGF的表达涉及Erk-1/2和RhoA的活化 | 第55-56页 |
| ·MSC-CM诱导SGC-7901细胞后EMT标志变化 | 第56-57页 |
| ·讨论 | 第57-58页 |
| ·小结 | 第58-60页 |
| 第三章 人骨髓MSCs分泌exosomes促进肿瘤细胞生长 | 第60-82页 |
| ·材料 | 第60-61页 |
| ·主要试剂与器材 | 第60-61页 |
| ·肿瘤细胞株SGC-7901细胞株 | 第61页 |
| ·主要仪器设备 | 第61页 |
| ·方法 | 第61-65页 |
| ·人骨髓MSCs分离培养及条件培养基(MSC-CM)的制备 | 第61页 |
| ·人骨髓MSC来源的exosomes的分离和纯化 | 第61页 |
| ·透射电镜观察exosomes形态 | 第61-62页 |
| ·SDS-PAGE分离蛋白及凝胶图象分析 | 第62页 |
| ·exosomes蛋白浓度测定 | 第62页 |
| ·Western-blot检测MSC-exosomes中CD9蛋白的表达 | 第62页 |
| ·流式细胞术检测人骨髓MSC-exosomes表面标志 | 第62页 |
| ·exosomes PKH26染色 | 第62-63页 |
| ·裸鼠致瘤模型 | 第63页 |
| ·免疫组织细胞化学 | 第63-64页 |
| ·Western-blot分析ERK1/2、Bcl-2 | 第64页 |
| ·RT-PCR | 第64-65页 |
| ·细胞增殖活性测定 | 第65页 |
| ·细胞周期分析t | 第65页 |
| ·统计分析 | 第65页 |
| ·结果 | 第65-78页 |
| ·人骨髓MSCs分泌exosomes的含量 | 第65页 |
| ·人骨髓MSCs来源的exosomes的形态特征 | 第65-66页 |
| ·Exosomes的蛋白组分分析 | 第66页 |
| ·Exosomes相关蛋白分子CD9检测 | 第66-67页 |
| ·人骨髓MSCs来源的exosomes表面标志 | 第67页 |
| ·Exosomes PKH26染色 | 第67-68页 |
| ·MSC-exosomes体内促进肿瘤细胞生长 | 第68页 |
| ·MSC-exosomes促进体内肿瘤血管形成及肿瘤细胞增殖 | 第68-74页 |
| ·MSC-exosomes体外对SGC-7901肿瘤细胞生长无直接促进作用 | 第74页 |
| ·MSC-exosomes体外诱导SGC-7901细胞VEGF、CXCR4及ERK活性的高表达 | 第74-78页 |
| ·讨论 | 第78-81页 |
| ·小结 | 第81-82页 |
| 第四章 胃癌微环境中间质干细胞的特性及作用 | 第82-102页 |
| ·材料 | 第82-83页 |
| ·病例来源及标本采集 | 第82页 |
| ·实验动物 | 第82页 |
| ·SGC-7901人胃癌细胞株 | 第82页 |
| ·主要试剂、耗材 | 第82-83页 |
| ·主要仪器 | 第83页 |
| ·方法 | 第83-87页 |
| ·人胃癌组织MSC(hGC-MSC)及胃癌组织块原位胃移植瘤中MSC的分离培养 | 第83-84页 |
| ·透射电镜观察hGC-MSCs形态 | 第84页 |
| ·流式细胞仪检测hGC-MSCs表面标记 | 第84页 |
| ·hGC-MSCs细胞生长曲线 | 第84页 |
| ·细胞周期 | 第84页 |
| ·RNA提取以及逆转录 | 第84页 |
| ·PCR扩增 | 第84-85页 |
| ·细胞及免疫组织化学染色 | 第85页 |
| ·成骨诱导培养 | 第85-86页 |
| ·成脂诱导培养 | 第86页 |
| ·裸鼠致瘤实验 | 第86页 |
| ·裸鼠皮下移植瘤的建立和传代 | 第86页 |
| ·原位移植模型的建立 | 第86-87页 |
| ·原位移植致瘤率及移植瘤侵袭和转移情况观察 | 第87页 |
| ·1SGC-7910细胞裸鼠体内原位胃癌MRI检测 | 第87页 |
| ·胃癌组织块原位胃移植瘤中MSC的分离培养 | 第87页 |
| ·结果 | 第87-98页 |
| ·hGC-MSCs的细胞形态及超微结构 | 第87-88页 |
| ·hGC-MSCs的生长特性 | 第88-89页 |
| ·hGC-MSC表面标志及基因表达 | 第89-90页 |
| ·hGC-MSCs的分化潜能及细胞化学染色 | 第90-91页 |
| ·hGC-MSCs裸鼠体内致瘤实验 | 第91-92页 |
| ·原位移植瘤生长情况 | 第92页 |
| ·病理学检查 | 第92-93页 |
| ·组织学检查 | 第93页 |
| ·肿瘤生长情况及转移发生率 | 第93页 |
| ·免疫组化PCNA染色 | 第93-97页 |
| ·胃癌组织块原位胃移植瘤中MSC的分离培养 | 第97-98页 |
| ·讨论 | 第98-100页 |
| ·小结 | 第100-102页 |
| 第五章 骨髓MSCs肿瘤微环境下转化为肿瘤相关成纤维母细胞促进肿瘤生长 | 第102-112页 |
| ·材料 | 第102-103页 |
| ·实验动物 | 第102页 |
| ·SGC-7901人胃癌细胞株 | 第102页 |
| ·主要器材试剂 | 第102-103页 |
| ·主要仪器设备 | 第103页 |
| ·方法 | 第103-104页 |
| ·细胞培养及裸鼠致瘤模型建立参见2.2.1 | 第103页 |
| ·病理分析 | 第103页 |
| ·免疫组织化学染色 | 第103页 |
| ·总RNA提取和逆转录 | 第103页 |
| ·PCR扩增 | 第103-104页 |
| ·定量PCR反应 | 第104页 |
| ·核磁共振检测 | 第104页 |
| ·鸡胚绒毛尿囊膜(CAM)血管形成试验 | 第104页 |
| ·Western-blot | 第104页 |
| ·统计学分析 | 第104页 |
| ·结果 | 第104-110页 |
| ·HMSC、GC-MSC+SGC-7901裸鼠体内致瘤作用观察 | 第104-105页 |
| ·HMSC迁移能力观察 | 第105页 |
| ·HMSC及GC-MSC鸡胚血管形成试验 | 第105-106页 |
| ·HMSC、hGC-MSC及SGC-7901细胞F-actin染色 | 第106-107页 |
| ·SGC-7901细胞上清液及胃癌组织体外HMSC共培养后F-actin染色 | 第107页 |
| ·肿瘤微环境作用后HMSC α-SMA、Vimetin表达增强 | 第107-110页 |
| ·讨论 | 第110-111页 |
| ·小结 | 第111-112页 |
| 第六章 结论与展望 | 第112-114页 |
| 参考文献 | 第114-124页 |
| 致谢 | 第124-126页 |
| 在学期间发表的论文及成果 | 第126-128页 |
| 一、发表论文 | 第126-127页 |
| 二、获奖 | 第127-128页 |
| 三、主持科研课题 | 第128页 |
| 四、编写专著 | 第128页 |
