| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-14页 |
| 缩写词简表 | 第14-15页 |
| 前言 | 第15-17页 |
| 技术路线 | 第17-19页 |
| 第二章 实验材料与方法 | 第19-39页 |
| ·材料 | 第19-26页 |
| ·结直肠癌细胞系 | 第19页 |
| ·结直肠癌组织标本 | 第19页 |
| ·组织芯片及随访资料 | 第19-20页 |
| ·菌株和质粒 | 第20-25页 |
| ·luciferase寡核苷酸片段 | 第25页 |
| ·主要仪器 | 第25-26页 |
| ·方法 | 第26-39页 |
| ·Real-time PCR | 第26-31页 |
| ·miRNA的功能研究 | 第31-33页 |
| ·构建荧光素酶报告质粒 | 第33-36页 |
| ·Western-blot检测miR-138、miR-139-5p靶基因的表达 | 第36-37页 |
| ·原位杂交检测miRNA在组织芯片的表达情况 | 第37-38页 |
| ·统计学软件及分析 | 第38-39页 |
| 第三章 结果 | 第39-82页 |
| 第一部分：EMT相关miRNA在结直肠癌细胞及临床组织标本中的表达 | 第39-54页 |
| ·细胞及组织RNA样品质检 | 第39页 |
| ·连续多个时间点检测miR-138、miR-139-5p、miR-1180的表达 | 第39-46页 |
| ·miR-138在24例患者癌组织及其配对正常粘膜中的表达 | 第46-48页 |
| ·miR-139-5p在18例患者癌组织及其配对正常粘膜中的表达 | 第48-50页 |
| ·原位杂交方法检测miR-138在结直肠癌及其配对粘膜、淋巴结组织芯片中的表达 | 第50-54页 |
| 第二部分 EMT相关miRNA在结直肠癌细胞中的细胞生物学功能 | 第54-63页 |
| ·miR-138、miR-139-5p和miR-1180的瞬时转染 | 第54-55页 |
| ·Transwell检测miRNA对SW480细胞侵袭能力的影响 | 第55-58页 |
| ·流式细胞仪检测miRNA对SW480细胞周期及凋亡能力的影响 | 第58-60页 |
| ·MTT实验检测miR-138对HT-29细胞生长活力的影响 | 第60-61页 |
| ·划痕实验检测miR-138对SW480细胞迁移能力的影响 | 第61-63页 |
| 第三部分 miR-138、miR-139-5p的生物信息学分析及其下游靶基因的鉴定 | 第63-82页 |
| ·生物信息学分析miR-138、miR-139-5p的基本信息 | 第63-64页 |
| ·生物信息学对miR-138、miR-139-5p下游靶基因预测 | 第64-69页 |
| ·瞬时转染miR-138、miR-139-5p后target gene的表达 | 第69-73页 |
| ·荧光素酶报告系统分析miR-138负调控的靶基因EZRIN,miR-139-5p负调控的靶基因CDH1、ZEB2 | 第73-80页 |
| ·Western-blot验证miR-138调控的靶基因EZRIN,miR-139-5p调控的靶基因CDH1 | 第80-82页 |
| 第四章 讨论 | 第82-93页 |
| ·Real-time PCR验证芯片结果中的差异表达miRNA分子 | 第84-85页 |
| ·肿瘤相关生长因子TGF-β诱导结肠癌细胞SW480发生EMT | 第84-85页 |
| ·连续多个时间点验证芯片结果中的差异miRNA | 第85页 |
| ·miR-138抑制结肠癌发生EMT | 第85-91页 |
| ·miR-138在结肠癌细胞系中的细胞生物学功能研究 | 第86-87页 |
| ·miR-138生物信息学分析及其下游靶基因的鉴定 | 第87-89页 |
| ·临床组织标本验证miR-138的表达 | 第89-91页 |
| ·miR-139-5p可能促进结肠癌发生EMT | 第91-93页 |
| 结论 | 第93-94页 |
| 参考文献 | 第94-99页 |
| 综述 | 第99-119页 |
| 参考文献 | 第111-119页 |
| 致谢 | 第119-120页 |
| 攻读博士学位期间主要的研究成果 | 第120页 |
