| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-17页 |
| 主要縮略词简表 | 第17-18页 |
| 第一章 前言 | 第18-22页 |
| 第二章 材料与方法 | 第22-45页 |
| 1 材料 | 第22-33页 |
| ·细胞系和组织样本 | 第22页 |
| ·菌株和质粒载体 | 第22页 |
| ·试剂 | 第22-32页 |
| ·主要仪器 | 第32-33页 |
| 2 方法 | 第33-45页 |
| ·细胞基因组DNA提取(根据试剂盒说明书进行操作) | 第33-34页 |
| ·细胞RNA制备 | 第34-35页 |
| ·细胞蛋白抽提及定量 | 第35-36页 |
| ·Western blot检测 | 第36-37页 |
| ·质粒、miRNA或siRNA转染目的细胞 | 第37页 |
| ·实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测 | 第37-38页 |
| ·免疫组织化学法 | 第38页 |
| ·原位杂交 | 第38-39页 |
| ·免疫组织化学法和原位杂交结果分析 | 第39页 |
| ·细胞计数实验 | 第39页 |
| ·细胞划痕实验 | 第39-40页 |
| ·组蛋白甲基转移酶活性检测(根据试剂盒说明书进行操作) | 第40页 |
| ·组蛋白去甲基化酶活性检测(根据试剂盒说明书进行操作) | 第40页 |
| ·DNA甲基转移酶活性或DNMT3A活性检测 | 第40页 |
| ·亚硫酸氢盐修饰样品gDNA制备(根据试剂盒说明书进行操作) | 第40-41页 |
| ·直接测序法(Bisulfite sequencing PCR,BSP) | 第41-42页 |
| ·甲基化特异性PCR(Methylated specific PCR,MSP) | 第42页 |
| ·载体构建 | 第42-43页 |
| ·荧光报告素酶活性分析 | 第43页 |
| ·ChIP检测(按照试剂盒说明书操作) | 第43-44页 |
| ·统计学分析 | 第44-45页 |
| 第三章 结果 | 第45-120页 |
| 第一部分 全基因组DNA甲基化谱中低甲基化基因的验证及其与临床相关性研究 | 第45-69页 |
| ·全基因组DNA甲基化谱中低甲基化基因的重新筛选与验证 | 第45-59页 |
| ·低甲基化基因F10、POTEH、CPEB1、LMO3、ELFN2及PRDM16在脑胶质瘤组织中的表达及其与基因低甲基化的关系 | 第59-63页 |
| ·低甲基化基因的甲基化状态与患者临床参数及预后的关系 | 第63-66页 |
| ·低甲基化基因的表达与患者临床参数及预后的关系 | 第66-68页 |
| 小结 | 第68-69页 |
| 第二部分 miR-101调控脑胶质瘤中低甲基化基因的甲基化水平和其表达的作用机制 | 第69-113页 |
| ·脑胶质瘤中调控低甲基化基因的miRNA的预测 | 第69-71页 |
| ·miR-101在脑胶质瘤组织和细胞中的表达及其与脑胶质瘤患者临床参数和预后预测的关系分析 | 第71-73页 |
| ·miR-101抑制脑胶质瘤细胞的增殖和迁移能力 | 第73-75页 |
| ·低甲基化基因CPEB1、LMO3、ELFN2及PRDM16作为miR-101靶基因的验证 | 第75-82页 |
| ·miR-101通过直接靶向抑制组蛋白甲基化转移酶EZH2、EED和DNA甲基化转移酶DNMT3A影响LMO3基因核心启动子区的组蛋白甲基化修饰,调控LM03的甲基化水平,抑制其表达 | 第82-99页 |
| ·miR-101通过靶向抑制EZH2、EED及DNMT3A影响CPEB1、ELFN及PRDM16基因启动子区的组蛋白甲基化修饰而调控它们的甲基化状态,间接抑制其表达 | 第99-112页 |
| 小结 | 第112-113页 |
| 第三部分 miR-101通过组蛋白甲基化修饰调控脑胶质瘤中高甲基化基因LRRC的作用机制 | 第113-120页 |
| ·miR-101间接调控脑胶质瘤细胞中的高甲基化基因LRRC4的表达 | 第113-115页 |
| ·miR-101通过靶向EZH2、EED及DNMT3A影响脑胶质瘤细胞中LRRC4基因核心启动子区的组蛋白甲基化修饰,减低LRRC4基因的高甲基化水平,间接恢复其在脑胶质瘤细胞中的表达 | 第115-119页 |
| ·高甲基化基因LRRC4表达与脑胶质瘤患者预后预测的关系 | 第119-120页 |
| 第四章 讨论 | 第120-130页 |
| 第一部分 全基因组甲基化芯片中低甲基化基因的验证及其与临床相关性研究 | 第120-123页 |
| ·发现并证实了脑胶质瘤中6个新的低甲基化基因 | 第120-122页 |
| ·F10、POTEH、CPEB1、ELFN2、LMO3及PRDM16在脑胶质瘤中的低甲基化或高表达可以作为脑胶质瘤患者预后预测的重要标志 | 第122-123页 |
| 第二部分 miR-101调控脑胶质瘤中低甲基化基因甲基化水平及表达的作用机制 | 第123-128页 |
| ·miR-101在脑胶质瘤组织和细胞中的表达及其与脑胶质瘤患者临床参数和预后预测的关系分析 | 第124-125页 |
| ·miR-101直接靶向抑制低甲基化基因CPEB1、ELFN2、PRDM16的表达 | 第125页 |
| ·miR-101通过靶向抑制组蛋白甲基转移酶EZH2、EED及DNA甲基转移酶DNMT3A的表达,调控低甲基化基因核心启动子区组蛋白甲基化修饰,影响它们的甲基化状态,间接抑制它们在脑胶质瘤细胞中的表达 | 第125-128页 |
| 第三部分 miR-101调控脑胶质瘤中高甲基化基因LRRC4的作用机制 | 第128-130页 |
| 结论 | 第130-131页 |
| 参考文献 | 第131-141页 |
| 综述 | 第141-153页 |
| 参考文献 | 第147-153页 |
| 致谢 | 第153-154页 |
| 攻读博士学位期间主要研究成果 | 第154-155页 |
