| 摘要 | 第1-6页 |
| Abstract | 第6-11页 |
| 第1章 绪论 | 第11-20页 |
| ·血吸虫和血吸虫病 | 第11-12页 |
| ·血吸虫的种类、分布及生活史 | 第11页 |
| ·血吸虫病的流行情况 | 第11页 |
| ·日本血吸虫及生活史 | 第11-12页 |
| ·血吸虫相关的疫苗和诊断的研究 | 第12-16页 |
| ·血吸虫疫苗研究 | 第12-14页 |
| ·天然制备的疫苗 | 第13页 |
| ·基因重组疫苗 | 第13页 |
| ·核酸疫苗 | 第13-14页 |
| ·表位疫苗和合成肽疫苗 | 第14页 |
| ·多价疫苗或多基因疫苗 | 第14页 |
| ·血吸虫病免疫诊断的研究进展 | 第14-16页 |
| ·皮内实验 | 第14-15页 |
| ·环卵沉淀实验(COPT) | 第15页 |
| ·酶联免疫吸附实验 | 第15页 |
| ·胶体染料试纸条法 | 第15页 |
| ·血吸虫病免疫诊断用抗原和抗体 | 第15-16页 |
| ·天然抗原 | 第15-16页 |
| ·重组抗原 | 第16页 |
| ·吸虫嘌呤代谢研究进展 | 第16-18页 |
| ·血吸虫嘌呤代谢 | 第16-17页 |
| ·血吸虫嘌呤代谢中相关的酶类 | 第17-18页 |
| ·嘌呤核苷磷酸化酶 | 第17页 |
| ·磷酸核糖转移酶 | 第17-18页 |
| ·本研究背景内容及意义 | 第18-19页 |
| ·本研究选题背景 | 第18页 |
| ·研究内容及意义 | 第18-19页 |
| ·本研究的技术路线 | 第19-20页 |
| 第2章 SjAPRTs的生物信息学分析 | 第20-25页 |
| ·引言 | 第20页 |
| ·材料及方法 | 第20页 |
| ·结果与讨论 | 第20-25页 |
| ·SjAPRTs基因及其编码蛋白的一些性质和特征 | 第20-21页 |
| ·同源性分析 | 第21-22页 |
| ·同源性分析 | 第22-25页 |
| 第3章 SjAPRTs基因的克隆与原核表达及纯化 | 第25-39页 |
| ·引言 | 第25页 |
| ·材料 | 第25-27页 |
| ·所用载体与菌株 | 第25页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第25-26页 |
| ·部分试剂的配方 | 第26-27页 |
| ·方法 | 第27-33页 |
| ·重组质粒的构建 | 第27-30页 |
| ·重组基因在大肠杆菌中的表达和纯化 | 第30-33页 |
| ·结果和讨论 | 第33-39页 |
| ·外源基因片段的制备 | 第33-34页 |
| ·pET28a载体片断的制备 | 第34-35页 |
| ·重组质粒的PCR鉴定 | 第35页 |
| ·阳性克隆的表达和重组蛋白溶解性鉴定 | 第35-36页 |
| ·重组蛋白的纯化 | 第36-39页 |
| 第4章 SjAPRTs在不同虫期转录和表达差异的研究 | 第39-53页 |
| ·引言 | 第39页 |
| ·SjAPRTs各虫期转录差异的研究 | 第39-40页 |
| ·不同虫期材料及免疫多抗兔血清的制备 | 第39页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第39-40页 |
| ·部分试剂的配方 | 第40页 |
| ·方法 | 第40-44页 |
| ·各虫期总RNA的抽提 | 第40-41页 |
| ·cDNA模板制备方法 | 第41页 |
| ·PCR引物的设计与合成 | 第41页 |
| ·PCR扩增各虫期SjAPRTs基因序列 | 第41-42页 |
| ·Realtime PCR分析SjAPRTs基因在各个虫期的相对表达情况 | 第42页 |
| ·Real time PCR标准曲线的绘制 | 第42页 |
| ·相对表达指数的确定 | 第42-43页 |
| ·不同虫期总蛋白的抽提 | 第43页 |
| ·Western blotting检测SjAPRTs在各虫期的表达情况 | 第43-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-53页 |
| ·总RNA的抽提与鉴定 | 第44页 |
| ·各虫期RT-PCR结果 | 第44-45页 |
| ·Real-time PCR分析SjAPRTs各虫期转录本水平差异 | 第45-50页 |
| ·标准曲线的构建 | 第45-50页 |
| ·不同虫期相对表达指数的确定 | 第50页 |
| ·SjAPRTs在不同虫期蛋白表达差异结果 | 第50-53页 |
| ·不同虫期总蛋白SDS-PAGE电泳分析 | 第50-51页 |
| ·SjAPRTs各虫期蛋白表达差异 | 第51-53页 |
| 第5章 sjrAPRTs免疫原性分析 免疫保护性的研究及诊断价值的初步评价 | 第53-61页 |
| ·引言 | 第53页 |
| ·材料 | 第53-55页 |
| ·实验用重组蛋白、感染动物血清及试验动物 | 第53页 |
| ·主要试剂与仪器 | 第53-54页 |
| ·部分实验试剂的配方 | 第54-55页 |
| ·方法 | 第55-57页 |
| ·rSjAPRTs免疫反应性分析 | 第55页 |
| ·动物保护性实验方案 | 第55-56页 |
| ·间接ELISA法检测感染血清中的抗体 | 第56-57页 |
| ·结果与讨论 | 第57-61页 |
| ·rSjAPRTs Western blot检测免疫反应性结果 | 第57-58页 |
| ·SjAPRTl动物保护性实验结果 | 第58页 |
| ·ELISA实验结果 | 第58-61页 |
| ·rSjAPRTs包被浓度的确定 | 第58-60页 |
| ·间接ELISA方法检测疫区病人血清的敏感性与特异性 | 第60-61页 |
| 结论 | 第61-62页 |
| 参考文献 | 第62-65页 |
| 致谢 | 第65页 |
