| 摘要 | 第1-11页 |
| Abstract | 第11-13页 |
| 1 引言 | 第13-25页 |
| ·苏云金芽胞杆菌概述 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌晶体蛋白的分类 | 第13-14页 |
| ·苏云金芽胞杆菌cry 基因的表达调控 | 第14页 |
| ·代谢途径对苏云金芽胞杆菌芽胞与晶体蛋白形成影响 | 第14-15页 |
| ·γ-氨基丁酸代谢旁路的研究进展 | 第15-22页 |
| ·γ-氨基丁酸代谢旁路的基本性质 | 第17-18页 |
| ·细菌中参与γ-氨基丁酸代谢旁路的相关基因簇 | 第18-20页 |
| ·γ-氨基丁酸和琥珀酸半醛在基因调控中的研究进展 | 第20-22页 |
| ·Sigma54 因子在原核生物中的研究进展 | 第22-23页 |
| ·Sigma54 因子的作用机制 | 第23页 |
| ·Sigma54 因子对细菌基因调控的研究 | 第23页 |
| ·立题依据与目的意义 | 第23-25页 |
| ·立题依据 | 第23-24页 |
| ·目的意义 | 第24-25页 |
| 2 实验材料与方法 | 第25-43页 |
| ·实验材料与方法 | 第25-29页 |
| ·菌株与质粒 | 第25-27页 |
| ·抗生素与培养基 | 第27页 |
| ·酶与生化试剂 | 第27-28页 |
| ·溶液与缓冲液 | 第28-29页 |
| ·仪器设备 | 第29-30页 |
| ·实验研究方法 | 第30-43页 |
| ·Bt 总DNA 的提取 | 第30页 |
| ·目的基因PCR 扩增 | 第30-32页 |
| ·TRIzol 法提取Bt 总RNA | 第32页 |
| ·RNA 纯化 | 第32-33页 |
| ·cDNA 的合成 | 第33页 |
| ·RT-PCR | 第33页 |
| ·荧光定量PCR | 第33-34页 |
| ·SMARTerTM RACE | 第34-36页 |
| ·琼脂糖凝胶电泳 | 第36页 |
| ·酶切反应 | 第36页 |
| ·DNA 的回收 | 第36-37页 |
| ·DNA 片段的连接 | 第37页 |
| ·大肠杆菌JM109 热激感受态细胞制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌的热激转化 | 第37页 |
| ·大肠杆菌SCS110 电击感受态细胞制备 | 第37页 |
| ·大肠杆菌电击转化方法 | 第37-38页 |
| ·Bt 电击感受态细胞制备 | 第38页 |
| ·Bt 菌株的电击转化 | 第38页 |
| ·重组质粒的提取 | 第38-39页 |
| ·重组质粒的鉴定 | 第39页 |
| ·基因序列的测定及分析 | 第39-40页 |
| ·细胞培养和诱导表达 | 第40页 |
| ·目的蛋白的镍柱纯化 | 第40-41页 |
| ·少量Bt 蛋白的检测 | 第41页 |
| ·SDS-PAGE 电泳 | 第41页 |
| ·测定Bt 菌株生长曲线 | 第41页 |
| ·活芽胞记数 | 第41页 |
| ·β-半乳糖苷酶酶活分析 | 第41-43页 |
| 3 结果与分析 | 第43-68页 |
| ·GABA 和SSA 对Bt 中gab 基因簇转录活性的影响 | 第43-49页 |
| ·GABA 和SSA 对gabT 启动子的诱导作用 | 第43-44页 |
| ·GABA 和SSA 对突变体中gabT 启动子的诱导作用 | 第44-46页 |
| ·GABA 和SSA 对gabR 启动子的转录活性的影响 | 第46-49页 |
| ·GABA 和SSA 对Bt 中sigL 基因转录活性的影响 | 第49-51页 |
| ·sigL 基因启动子与lacZ 融合表达质粒的构建与活性分析 | 第49-51页 |
| ·GABA 和SSA 对sigL 基因启动子的转录活性的影响 | 第51页 |
| ·Bt 中gab 基因簇转录情况的分析 | 第51-54页 |
| ·gab 基因簇转录起始位点的分析 | 第51-52页 |
| ·gab 基因簇在诱导条件下的RT-PCR 分析 | 第52-54页 |
| ·σL 和GabR 蛋白的表达纯化 | 第54-60页 |
| ·sigL 基因与pGEX-4T-1 表达质粒的构建与表达 | 第54-55页 |
| ·gabR 基因与pGEX-4T-1、pET-21b 表达质粒的构建与表达 | 第55-59页 |
| ·GabR 蛋白的纯化 | 第59-60页 |
| ·GABA 旁路阻断对Bt 芽胞与晶体蛋白产量的影响 | 第60-62页 |
| ·gab 基因簇基因缺失对菌株生长的影响 | 第60-61页 |
| ·gab 基因簇基因缺失对菌株产生活芽胞数的影响 | 第61页 |
| ·gab 基因簇基因缺失对晶体蛋白产量的影响 | 第61-62页 |
| ·sigL 基因缺失对Bt 芽胞与晶体蛋白产量的影响 | 第62-68页 |
| ·sigL 基因缺失对Bt 菌株生长的影响 | 第62-63页 |
| ·sigL 基因缺失对Bt 菌株芽胞产量的影响 | 第63-64页 |
| ·HD73 和HD(△sigL)在不同氮源培养基中晶体蛋白的差异 | 第64页 |
| ·HD73 和HD(△sigL)中cry1Ac 基因转录活性的分析 | 第64-68页 |
| 4 讨论 | 第68-71页 |
| ·GABA 和SSA 对Bt 中gab 基因簇转录的诱导 | 第68页 |
| ·GABA 旁路阻断对Bt 的影响 | 第68-69页 |
| ·sigL 基因对Bt 生长代谢及晶体蛋白的重要性 | 第69页 |
| ·下一步工作展望 | 第69-71页 |
| 5 结论 | 第71-72页 |
| 致谢 | 第72-73页 |
| 参考文献 | 第73-80页 |
| 攻读硕士学位期间发表的学术论文 | 第80页 |
