| 中文摘要 | 第1-12页 |
| 英文摘要 | 第12-14页 |
| 1 前言 | 第14-28页 |
| ·胚胎着床及其分子调控 | 第14-18页 |
| ·胚胎着床 | 第14-15页 |
| ·胚胎着床的分子调控 | 第15-18页 |
| ·多胺及其相关基因 | 第18-24页 |
| ·多胺及其代谢网络 | 第18-21页 |
| ·鸟氨酸脱羧酶(Odc) | 第21页 |
| ·鸟氨酸脱羧酶抗酶 | 第21-22页 |
| ·腺苷甲硫氨酸脱羧酶等多胺合成酶 | 第22-23页 |
| ·亚精胺/精胺N1乙酰转移酶等多胺代谢酶 | 第23-24页 |
| ·多胺与哺乳动物发育及生殖 | 第24-27页 |
| ·多胺与胚胎发育 | 第24-25页 |
| ·多胺与生殖激素 | 第25-26页 |
| ·多胺在子宫中的生物活性 | 第26页 |
| ·多胺与雄性生殖 | 第26-27页 |
| ·实验目的及意义 | 第27-28页 |
| 2 材料与方法 | 第28-48页 |
| ·实验动物 | 第28页 |
| ·动物模型及取材 | 第28-29页 |
| ·早期妊娠 | 第28页 |
| ·假孕 | 第28页 |
| ·延迟着床和激活 | 第28-29页 |
| ·激素处理 | 第29页 |
| ·DFMO和4MCHA处理 | 第29页 |
| ·小鼠子宫内膜上皮和基质细胞的分离、培养及处理 | 第29-32页 |
| ·培养前准备工作 | 第29-30页 |
| ·发情期小鼠的鉴定 | 第30页 |
| ·小鼠子宫内膜上皮细胞的分离与培养 | 第30-31页 |
| ·小鼠子宫内膜基质细胞的分离与培养 | 第31页 |
| ·体外培养小鼠子宫内膜细胞的处理 | 第31-32页 |
| ·多胺相关基因的克隆及序列分析 | 第32-37页 |
| ·菌种和主要分子生物学试剂 | 第32页 |
| ·PCR引物设计 | 第32-33页 |
| ·组织中总RNA的提取 | 第33页 |
| ·DNA的消化 | 第33页 |
| ·反转录反应 | 第33页 |
| ·PCR反应 | 第33-34页 |
| ·扩增产物的回收及载体连接 | 第34-35页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第35页 |
| ·转化重组质粒 | 第35-36页 |
| ·插入方向鉴定 | 第36页 |
| ·核苷酸序列的测定 | 第36页 |
| ·cRNA片段的地高辛标记 | 第36-37页 |
| ·原位杂交 | 第37-38页 |
| ·载玻片的处理 | 第37页 |
| ·冰冻切片方法 | 第37页 |
| ·原位杂交试剂及溶液 | 第37-38页 |
| ·原位杂交流程 | 第38页 |
| ·Odc过表达载体的构建 | 第38-40页 |
| ·子宫内膜细胞的瞬时转染 | 第40页 |
| ·实时定量RT-PCR | 第40-43页 |
| ·实时定量PCR引物的设计 | 第40-41页 |
| ·总RNA的提取 | 第41-42页 |
| ·DNA的消化 | 第42页 |
| ·反转录反应 | 第42页 |
| ·实时定量PCR反应 | 第42-43页 |
| ·融解曲线的分析 | 第43页 |
| ·~(ΔΔ)Ct法分析基因表达的相对差异 | 第43页 |
| ·Western blot | 第43-47页 |
| ·Western blot试剂及溶液 | 第43-44页 |
| ·样品提取及蛋白浓度的测定 | 第44-45页 |
| ·SDS聚丙烯酰胺凝胶电泳 | 第45-46页 |
| ·Immunoblot及显影 | 第46-47页 |
| ·子宫内膜基质细胞存活数目以及增殖活性的测定 | 第47页 |
| ·细胞存活率的测定 | 第47页 |
| ·MTT法测定细胞增殖活力 | 第47页 |
| ·数据统计 | 第47-48页 |
| 3 结果 | 第48-61页 |
| ·多胺相关基因的克隆和鉴定 | 第48页 |
| ·多胺相关基因在围着床期小鼠子宫中的表达 | 第48-51页 |
| ·原位杂交检测多胺相关基因在围着床期小鼠子宫中的表达 | 第48-49页 |
| ·实时定量PCR验证多胺相关基因在妊娠第5天子宫中的表达 | 第49-50页 |
| ·Western blot检测妊娠第5天子宫中Odc蛋白水平及变化 | 第50-51页 |
| ·活性胚泡对围着床期子宫中多胺相关基因表达的影响 | 第51页 |
| ·原位杂交检测多胺相关基因在假孕子宫中的表达 | 第51页 |
| ·原位杂交检测多胺相关基因在延迟着床和激活子宫中的表达 | 第51页 |
| ·类固醇激素对多胺相关基因在子宫中表达的影响 | 第51-52页 |
| ·Odc及多胺水平对子宫内膜细胞中Oaz1表达的调节 | 第52-53页 |
| ·Odc过表达载体的构建以及对子宫内膜细胞转染效果的鉴定 | 第52页 |
| ·Odc及多胺水平对子宫内膜细胞中Oaz1表达的影响 | 第52-53页 |
| ·多胺水平对子宫内膜细胞中Sat等基因表达的调节 | 第53-55页 |
| ·DFMO处理对小鼠胚胎着床的影响 | 第55-57页 |
| ·DFMO处理对正常妊娠小鼠胚胎着床的影响 | 第55-56页 |
| ·DFMO处理对小鼠延迟激活着床的影响 | 第56-57页 |
| ·Odc及多胺水平对子宫中Amd1等基因表达的影响 | 第57-59页 |
| ·DFMO注射对着床位点中Amd1等基因表达的影响 | 第57-58页 |
| ·Odc及多胺水平对子宫细胞中Amd1等基因表达的影响 | 第58-59页 |
| ·Odc及多胺水平对子宫内膜细胞增殖活性和p21表达的影响 | 第59-61页 |
| ·DFMO处理对子宫内膜基质细胞增殖活性的影响 | 第59页 |
| ·Odc及多胺水平对子宫内膜细胞中p21表达的影响 | 第59-61页 |
| 4 讨论 | 第61-67页 |
| ·Odc在围着床期子宫中的表达 | 第61-62页 |
| ·围着床期子宫中Odc等基因的调节 | 第62页 |
| ·子宫中多胺相关基因表达的相互协同 | 第62-64页 |
| ·Odc和Oaz1在子宫中的协同表达 | 第63页 |
| ·Sat等多胺代谢酶在子宫中的协同表达 | 第63-64页 |
| ·DFMO处理对于胚胎着床的影响 | 第64-65页 |
| ·Amd1对Odc的补偿效应 | 第65-67页 |
| 5 结论 | 第67-68页 |
| 致谢 | 第68-69页 |
| 参考文献 | 第69-82页 |
| 图版 | 第82-85页 |
| 攻读博士学位期间发表的论文 | 第85页 |
