| 摘要 | 第1-8页 |
| ABSTRACT | 第8-10页 |
| 缩略词表 | 第10-11页 |
| 1.综述 | 第11-23页 |
| ·溶血磷脂酸研究进展 | 第11-16页 |
| ·溶血磷脂酸的生物合成与释放 | 第11-12页 |
| ·溶血磷脂酸的生物学效应 | 第12页 |
| ·LPA受体介导的信号转导通路 | 第12-13页 |
| ·LPA与肿瘤 | 第13-16页 |
| ·LPA受体基因的研究进展 | 第16-18页 |
| ·LPA受体基因的克隆 | 第16-17页 |
| ·LPA受体基因的表达分布 | 第17页 |
| ·LPA基因的结构 | 第17-18页 |
| ·LPA受体基因的染色体定位 | 第18页 |
| ·国内外SPF猪研究进展 | 第18-23页 |
| ·国内外SPF猪研究状况 | 第18-19页 |
| ·净化方案 | 第19-21页 |
| ·环境控制 | 第19页 |
| ·获取胎儿的方法 | 第19-20页 |
| ·仔猪的哺育 | 第20页 |
| ·病原监测 | 第20-21页 |
| ·SPF猪在畜牧业中的作用 | 第21-23页 |
| 2.研究目的和意义 | 第23-25页 |
| 3 材料与方法 | 第25-37页 |
| ·材料 | 第25-29页 |
| ·主要数据库及信息软件 | 第25页 |
| ·DNA样品 | 第25-26页 |
| ·组织样品 | 第26页 |
| ·载体和菌株 | 第26页 |
| ·试剂盒及酶 | 第26页 |
| ·主要试剂 | 第26-27页 |
| ·主要试剂的配制 | 第27-28页 |
| ·主要分子生物学软件 | 第28页 |
| ·主要仪器 | 第28-29页 |
| ·方法 | 第29-37页 |
| ·猪EDG4、EDG7和OTUB1基因克隆 | 第29-32页 |
| ·引物设计 | 第29-30页 |
| ·RT-PCR扩增猪EDG4、EDG7和OTUB1基因 | 第30页 |
| ·PCR产物的纯化回收 | 第30页 |
| ·纯化PCR产物与pGEM-Teasy载体的连接 | 第30-31页 |
| ·感受态细胞的制备 | 第31页 |
| ·连接产物的转化 | 第31页 |
| ·菌液PCR鉴定 | 第31页 |
| ·阳性质粒酶切鉴定 | 第31页 |
| ·序列测定 | 第31-32页 |
| ·猪EDG4和EDG7基因定位 | 第32页 |
| ·基因定位的引物设计 | 第32页 |
| ·PCR分型方法 | 第32页 |
| ·数据分析方法 | 第32页 |
| ·猪EDG4、EDG7和OTUB1基因表达谱分析 | 第32-33页 |
| ·总RNA的提取 | 第32-33页 |
| ·cDNA的合成 | 第33页 |
| ·组织表达谱分析 | 第33页 |
| ·PCR—RFLP检测猪EDG4基因多态性(SNP) | 第33-34页 |
| ·SNP位点分析 | 第33页 |
| ·引物设计与PCR扩增 | 第33页 |
| ·PCR-RFLP验证并在群体中检测等位基因频率 | 第33-34页 |
| ·猪基因与性状的关联分析 | 第34页 |
| ·猪OTUB1亚细胞定位载体构建 | 第34页 |
| ·细胞转染 | 第34-37页 |
| ·细胞培养 | 第34-35页 |
| ·用脂质体法进行细胞转染 | 第35页 |
| ·转染后的细胞染色和融合蛋白的观察 | 第35-37页 |
| 4.结果 | 第37-49页 |
| ·EDG4、EDG7和OTUB1基因的功能分析 | 第37-41页 |
| ·功能域分析结果 | 第37-38页 |
| ·跨膜预测结果 | 第38-39页 |
| ·活性位点预测结果 | 第39-41页 |
| ·猪EDG4活性位点预测结果 | 第39页 |
| ·猪EDG7活性位点预测结果 | 第39-40页 |
| ·猪OTUB1活性位点预测结果 | 第40-41页 |
| ·猪EDG4、EDG7和OTUB1基因分子水平研究 | 第41-49页 |
| ·猪EDG4、EDG7和OTUB1基因克隆 | 第41页 |
| ·猪EDG4和EDG7基因的染色体定位 | 第41-43页 |
| ·猪EDG4、EDG7和OTUB1基因组织表达谱分析结果 | 第43-44页 |
| ·猪EDG4基因多态性 | 第44-45页 |
| ·猪EDG4等位基因群体多样性 | 第45-46页 |
| ·猪EDG4等位基因群体多样性的关联分析 | 第46页 |
| ·空载体pEGFP-N1亚细胞定位结果 | 第46-47页 |
| ·猪OTUB1亚细胞定位结果 | 第47-49页 |
| 5.讨论 | 第49-51页 |
| 6.小结 | 第51页 |
| 本研究的创新点与特色 | 第51页 |
| 值得进一步研究的问题 | 第51-53页 |
| 参考文献 | 第53-59页 |
| 附录1 本研究中所用引物 | 第59-60页 |
| 附录2 EDG4、EDG7和OTUB1系统进化关系 | 第60-61页 |
| 附录3 猪EDG4、EDG7和OTUB1蛋白质序列 | 第61-62页 |
| 附录4 研究生期间发表文章 | 第62-63页 |
| 致谢 | 第63页 |
