| 摘要 | 第1-9页 |
| ABSTRACT | 第9-11页 |
| 第一章 文献综述 | 第11-32页 |
| 第一节 cDNA文库的构建、发展及其应用 | 第11-22页 |
| 一、cDNA文库的构建策略 | 第11-17页 |
| 1、细胞总RNA的提取和mRNA的分离 | 第12-14页 |
| 2、第一链cDNA的合成 | 第14-15页 |
| 3、第二链cDNA的合成 | 第15页 |
| 4、双链cDNA的修饰及克隆进入质粒或噬菌体载体并导入宿主中繁殖 | 第15-16页 |
| 5、cDNA文库的质量评介 | 第16-17页 |
| 二、cDNA文库的种类 | 第17-18页 |
| 1、均一化cDNA文库 | 第17页 |
| 2、差减cDNA文库 | 第17-18页 |
| 3、固相cDNA文库 | 第18页 |
| 4、微量RNA的cDNA PCR文库 | 第18页 |
| 三、cDNA文库的发展 | 第18-19页 |
| 四、cDNA文库的应用 | 第19-22页 |
| 1、筛选与性状相关的重要基因 | 第19-20页 |
| 2、结合芯片技术研究基因表达、基因结构分析 | 第20页 |
| 3、cDNA文库有助于分子标记的开发 | 第20-22页 |
| 第二节 表达序列标签及其应用 | 第22-28页 |
| 一、EST技术的原理和方法 | 第22-24页 |
| 1、EST的概念和原理 | 第22-23页 |
| 2、EST获取方法和技术路线 | 第23-24页 |
| 二、EST技术的应用 | 第24-28页 |
| 1、用于构建基因组的遗传图谱与物理图谱 | 第24-25页 |
| 2、用于电子定位克隆 | 第25页 |
| 3、借以寻找新的基因 | 第25-26页 |
| 4、用于研究生物群体多态性 | 第26页 |
| 5、用于研究基因的功能 | 第26-27页 |
| 6、有助于品种的改良 | 第27页 |
| 7、促进基因芯片的发展 | 第27-28页 |
| 第三节 生物信息学 | 第28-32页 |
| 一、生物信息学的概念和特点 | 第28-29页 |
| 1、生物信息学的概念 | 第28-29页 |
| 二、国内外生物信息学的发展状况 | 第29-31页 |
| 三、展望 | 第31-32页 |
| 第二章 研究报告 | 第32-57页 |
| 1、材料与方法 | 第33-42页 |
| ·、植物材料 | 第33页 |
| ·、方法 | 第33-42页 |
| ·棉花总RNA的提取 | 第33-34页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第34-39页 |
| ·cDNA文库的测序 | 第39页 |
| ·质粒DNA的提取 | 第39页 |
| ·cDNA文库测序 | 第39页 |
| ·EST序列的获得 | 第39-40页 |
| ·Unigenes的获得 | 第40页 |
| ·序列间的相似性分析 | 第40页 |
| ·相似性序列功能注释 | 第40页 |
| ·SSR序列的获取 | 第40页 |
| ·EST-SSR引物的设计 | 第40-41页 |
| ·DNA提取、SSR扩增和电泳 | 第41页 |
| ·EST-SSR引物的筛选和在BC_1群体中的分离情况 | 第41-42页 |
| ·遗传作图 | 第42页 |
| 2、结果和分析 | 第42-52页 |
| ·、海7124 cDNA文库的构建 | 第42-44页 |
| ·RNA的提取 | 第42-43页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第43-44页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第43页 |
| ·海7124前期棉纤维/胚珠发育cDNA文库的质量鉴定 | 第43页 |
| ·cDNA文库插入片断的鉴定 | 第43-44页 |
| ·cDNA文库测序结果的分析 | 第44页 |
| ·Unigenes的获得 | 第44页 |
| ·序列间的相似性分析 | 第44-45页 |
| ·EST代谢途径分析 | 第45-46页 |
| ·EST功能分析 | 第46-47页 |
| ·海7124 EST的SSR发掘 | 第47-48页 |
| ·EST-SSR引物的筛选结果 | 第48页 |
| ·EST-SSR引物在海、陆回交群体间的分离情况 | 第48-49页 |
| ·EST-SSR遗传图谱的加密 | 第49-52页 |
| 3、讨论 | 第52-57页 |
| ·cDNA文库的构建 | 第52-53页 |
| ·ESTs代谢分析和功能分析 | 第53-54页 |
| ·EST-SSR的发掘 | 第54-55页 |
| ·EST-SSR引物的多态率 | 第55页 |
| ·EST-SSR位点分布 | 第55-57页 |
| 全文结论 | 第57-58页 |
| 参考文献 | 第58-65页 |
| 附表1 试剂配方 | 第65-66页 |
| 附表2 cDNA文库构建载体系列 | 第66-67页 |
| 附表3 本研究中使用的EST-SSR引物 | 第67-72页 |
| 致谢 | 第72页 |
