| 缩略词 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-10页 |
| ABSTRACT | 第10-13页 |
| 第一章 文献综述 | 第13-25页 |
| 第一节 转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 | 第13-17页 |
| ·国外转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 | 第13-15页 |
| ·国内转基因动物乳腺生物反应器的研究进展 | 第15-16页 |
| ·转基因动物乳腺生物反应器的优点 | 第16-17页 |
| 第二节 体细胞介导的转基因动物乳腺生物反应器研究进展 | 第17-20页 |
| ·体细胞介导的核移植技术制备转基因动物成为可能 | 第17-18页 |
| ·体细胞转基因的优势 | 第18-19页 |
| ·体细胞核移植制备动物乳腺生物反应器目前存在的问题 | 第19-20页 |
| 第三节 转基因沉默的研究进展 | 第20-25页 |
| ·转基因沉默的机制 | 第20-23页 |
| ·组蛋白的乙酰化与去乙酰化与转基因沉默 | 第21-22页 |
| ·DNA 甲基化与转基因沉默 | 第22-23页 |
| ·组蛋白甲基化与转基因沉默 | 第23页 |
| ·组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACis)及其作用机制 | 第23-25页 |
| 第二章 转染用人乳铁蛋白CDNA 乳腺特异性表达载体的准备 | 第25-33页 |
| 1 材料与方法 | 第25-29页 |
| ·材料 | 第25页 |
| ·仪器 | 第25页 |
| ·分子生物学试剂 | 第25页 |
| ·基因来源 | 第25页 |
| ·方法 | 第25-29页 |
| ·主要试剂的配制 | 第25-26页 |
| ·常规分子生物学操作方法 | 第26页 |
| ·BLC-14 载体质粒的构建 | 第26-27页 |
| ·乳腺特异性载体的制备 | 第27-28页 |
| ·转染基因的酶切、回收 | 第28-29页 |
| 2 结果 | 第29页 |
| 3 讨论 | 第29-33页 |
| 第三章 奶山羊乳腺上皮细胞的培养 | 第33-45页 |
| 1 材料与方法 | 第33-38页 |
| ·材料 | 第33-34页 |
| ·实验动物 | 第33页 |
| ·主要器械与仪器 | 第33页 |
| ·主要试剂 | 第33页 |
| ·试剂的配置 | 第33-34页 |
| ·方法 | 第34-38页 |
| ·鼠尾胶原的制备及使用 | 第34页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的获得与培养 | 第34-38页 |
| ·奶山羊的催乳 | 第34-35页 |
| ·奶山羊乳腺组织的手术取得 | 第35页 |
| ·胶原酶消化法分离乳腺上皮细胞 | 第35页 |
| ·细胞活力的测定 | 第35-36页 |
| ·细胞计数 | 第36页 |
| ·乳腺上皮细胞的纯化 | 第36页 |
| ·细胞生长状况的观察 | 第36-37页 |
| ·细胞贴壁率的测定 | 第36-37页 |
| ·细胞生长曲线的测定 | 第37页 |
| ·细胞冻存与解冻 | 第37-38页 |
| ·细胞冻存 | 第37页 |
| ·细胞的解冻 | 第37页 |
| ·细胞存活测试 | 第37-38页 |
| 2 结果 | 第38-42页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的原代培养 | 第38-39页 |
| ·奶山羊乳腺上皮细胞的纯化与传代 | 第39-41页 |
| ·细胞的贴壁率 | 第41页 |
| ·细胞生长曲线 | 第41-42页 |
| ·细胞的冻存与复苏 | 第42页 |
| 3 讨论 | 第42-45页 |
| 第四章 人乳铁蛋白基因电转染山羊乳腺上皮细胞克隆的获得及TSA 的处理 | 第45-59页 |
| 1 材料与方法 | 第45-49页 |
| ·材料 | 第45页 |
| ·仪器 | 第45页 |
| ·试剂及试剂的配制 | 第45页 |
| ·方法 | 第45-49页 |
| ·乳腺特异性载体的准备 | 第45-46页 |
| ·转染基因的酶切、回收 | 第46页 |
| ·电转染山羊乳腺上皮细胞 | 第46-47页 |
| ·药物筛选 | 第47页 |
| ·细胞株的获得与扩大培养 | 第47页 |
| ·细胞株的PCR 检测 | 第47-49页 |
| ·细胞株染色体 DNA 的提取 | 第47-48页 |
| ·PCR 检测 | 第48-49页 |
| ·TSA 处理及ELISA 检测 | 第49页 |
| 2 结果 | 第49-52页 |
| ·G418 筛选浓度的确定 | 第49-50页 |
| ·电转染用电压、脉冲时间的确定 | 第50页 |
| ·细胞电转染 | 第50-51页 |
| ·转染细胞DNA 的PCR 检测 | 第51-52页 |
| ·整合BLC-14 基因细胞的诱导表达及TSA 的处理 | 第52页 |
| 3. 讨论 | 第52-59页 |
| ·细胞的电转染 | 第52-54页 |
| ·G418 的筛选 | 第54-55页 |
| ·单细胞株的获得 | 第55-56页 |
| ·体细胞来源和培养代数 | 第56页 |
| ·TSA 的处理 | 第56-59页 |
| 参考文献 | 第59-66页 |
| 结论 | 第66-67页 |
| 致谢 | 第67-68页 |
