| 中文摘要 | 第1-8页 |
| 英文摘要 | 第8-10页 |
| 第一章 前言 | 第10-21页 |
| 第二章 分泌型PTD-hEGF表达载体的构建及表达 | 第21-33页 |
| 一、实验材料 | 第21-23页 |
| 1.质粒和菌种 | 第21页 |
| 2.酶和试剂 | 第21页 |
| 3.基因合成及测序 | 第21页 |
| 4 主要仪器 | 第21-22页 |
| 5.培养基及溶液配制 | 第22-23页 |
| 二、实验方法 | 第23-26页 |
| 1.全基因合成 | 第23页 |
| 2.限制性内切酶双酶切 | 第23页 |
| 3.低熔点琼脂糖胶回收OmpA-PTD-hEGF和pETs载体基因片段 | 第23-24页 |
| 4.重组质粒的粘端连接 | 第24页 |
| 5.pETs-OmpA-PTD-hEGF质粒的制备及鉴定 | 第24-25页 |
| 6.重组pETs-OmpA-PTD-hEGF及pLP-OmpA-hEGF质粒在大肠杆菌中的诱导分泌表达 | 第25页 |
| 7.Glysine-SDS-PAGE分析 | 第25-26页 |
| 8.表达产物的Western blot检测 | 第26页 |
| 三、实验结果 | 第26-31页 |
| 1.pETs-P-hEGF及pLP-OmpA-hEGF质粒 | 第26-28页 |
| 2.目的基因的获取 | 第28-29页 |
| 3.载体片段的获取 | 第29页 |
| 4.重组质粒的鉴定 | 第29-31页 |
| (1) 重组质粒菌落的PCR鉴定 | 第29-30页 |
| (2) 重组质粒基因的序列测定 | 第30-31页 |
| 5.Glysine-SDS-PAGE分析 | 第31页 |
| 6.Western blot | 第31页 |
| 四、讨论 | 第31-33页 |
| 第三章 分泌型PTD-hEGF及hEGF穿越细胞膜及血脑屏障的作用 | 第33-39页 |
| 一、实验材料 | 第33页 |
| 1.细胞培用品及试剂 | 第33页 |
| 2.实验动物 | 第33页 |
| 二、实验方法 | 第33-34页 |
| 1.细胞穿透实验 | 第33页 |
| 2.细胞膜穿透机制 | 第33-34页 |
| 3.血脑屏障穿透实验 | 第34页 |
| 三、实验结果 | 第34-37页 |
| 1.PTD-hEGF及hEGF对Balb/c 3T3细胞的穿入效率和越膜机制 | 第34-36页 |
| 2.PTD-hEGF及hEGF穿越小鼠血脑屏障 | 第36-37页 |
| 四、讨论 | 第37-39页 |
| 第四章 PTD-hEGF及hEGF治疗实验性阿尔采默病的研究 | 第39-53页 |
| 一、实验材料 | 第39页 |
| 二、实验方法 | 第39-43页 |
| 三、实验结果 | 第43-50页 |
| 1.静脉注射PTD-hEGF及hEGF在正常小鼠体内的时间分布 | 第43-44页 |
| 2.直肠给入PTD-hEGF及hEGF在正常小鼠体内的时间分布 | 第44-45页 |
| 3.血清中的浓度 | 第45-46页 |
| 4.行为学实验 | 第46-48页 |
| 5.神经干细胞研究 | 第48-49页 |
| 6.PET脑成像 | 第49-50页 |
| 四、讨论 | 第50-53页 |
| 第五章 PTD-hEGF及hEGF对实验性胃溃疡的防治研究 | 第53-57页 |
| 一、实验材料 | 第53页 |
| 二、实验方法 | 第53-54页 |
| 三、实验结果 | 第54-56页 |
| 四、讨论 | 第56-57页 |
| 第六章 重组PTD-hEGF及hEGF的皮肤过敏及毒性反应研究 | 第57-62页 |
| 一、实验材料 | 第57页 |
| 二、实验方法 | 第57-58页 |
| 三、实验结果 | 第58-60页 |
| 四、讨论 | 第60-62页 |
| 第七章 GST-PTD-hEGF的表达及其生物活性 | 第62-72页 |
| 一、实验材料 | 第62-63页 |
| 1.质粒和载体 | 第62页 |
| 2.菌种和细胞 | 第62页 |
| 3.酶试剂 | 第62页 |
| 4.细胞培养用品 | 第62页 |
| 5.实验仪器 | 第62-63页 |
| 二、实验方法 | 第63-65页 |
| 1.表达质粒的构建 | 第63页 |
| 2.诱导表达最佳温度的确定 | 第63页 |
| 3.菌体及其裂解 | 第63页 |
| 4.包涵体的纯化 | 第63页 |
| 5.表达产物的Western blot检测 | 第63-64页 |
| 6.蛋白含量测定 | 第64页 |
| 7.融合蛋白的促细胞增殖活性 | 第64-65页 |
| 8.细胞穿透实验 | 第65页 |
| 9.细胞膜穿透机制 | 第65页 |
| 10.猪皮肤在体穿透实验 | 第65页 |
| 三、实验结果 | 第65-71页 |
| 1.pGEX-PTD-hEGF表达质粒的构建 | 第65-66页 |
| 2.测序结果 | 第66页 |
| 3.不同温度下GST-PTD-hEGF的原核表达 | 第66页 |
| 4.GST-PTD-hEGF在原核中的表达形式 | 第66页 |
| 5.GST-PTD-hEGF的纯化 | 第66-67页 |
| 6.Western blot鉴定 | 第67页 |
| 7.GST-PTD-hEGF的促Balb/c 3T3细胞增殖活性 | 第67-68页 |
| 8.GST-PTD-hEGF细胞穿入实验 | 第68-69页 |
| 9.GST-PTD-hEGF的穿膜机制 | 第69-70页 |
| 10.皮肤在体穿透实验 | 第70-71页 |
| 四、讨论 | 第71-72页 |
| 结论 | 第72-73页 |
| 致谢 | 第73-74页 |
| 参考文献 | 第74-81页 |
| 附录一 英文缩写 | 第81-83页 |
| 附录二 在学期间撰写的文章 | 第83-84页 |
| 附录三 文献综述 | 第84-92页 |
| 附录四 已发文章:MTT法检测rhEGF生物活性 | 第92-94页 |
