| 摘要 | 第1-8页 |
| Abstract | 第8-10页 |
| 前言 | 第10-11页 |
| 第一部分 文献综述 | 第11-20页 |
| 1 气单胞菌分类 | 第11页 |
| 2 气单胞菌的生理生化及分离鉴定 | 第11-12页 |
| 3 血清型多样性 | 第12页 |
| 4 嗜水气单胞菌的毒力因子 | 第12-17页 |
| ·外毒素 | 第13-14页 |
| ·S层蛋白 | 第14页 |
| ·粘附素 | 第14-16页 |
| ·载铁体 | 第16页 |
| ·胞外蛋白酶(ECPase) | 第16-17页 |
| 5 细菌外膜蛋白 | 第17-20页 |
| ·外膜蛋白的生理功能 | 第17-18页 |
| ·细菌外膜蛋白与其致病作用 | 第18页 |
| ·血清型与外膜蛋白型 | 第18-19页 |
| ·外膜蛋白的免疫保护作用 | 第19-20页 |
| 第二部分 鳗源嗜水气单胞菌主要粘附素基因克隆及其原核表达载体构建 | 第20-30页 |
| 1.材料 | 第20页 |
| 2.方法 | 第20-24页 |
| ·引物设计 | 第20页 |
| ·嗜水气单胞菌ZN1基因组的提取 | 第20-21页 |
| ·PCR扩增嗜水气单胞菌ZN1主要粘附素基因 | 第21页 |
| ·PCR产物纯化 | 第21-22页 |
| ·大肠杆菌E.coli DH5α、E.coli DE3(BL21)感受态细胞制备 | 第22页 |
| ·Mah基因的克隆 | 第22-23页 |
| ·PCR鉴定阳性克隆 | 第23页 |
| ·酶切鉴定 | 第23页 |
| ·Mah基因表达载体的构建 | 第23-24页 |
| 3.结果与分析 | 第24-28页 |
| ·Mah基因的克隆、鉴定 | 第24-25页 |
| ·Mah基因序列分析 | 第25-27页 |
| ·表达载体的构建 | 第27-28页 |
| 4.讨论 | 第28-30页 |
| ·引物酶切位点的设计 | 第28页 |
| ·目的基因的选择 | 第28-29页 |
| ·表达载体的选择 | 第29-30页 |
| 第三部分 鳗源嗜水气单胞菌主要粘附素基因的表达及其产物的纯化复性 | 第30-36页 |
| 1.材料 | 第30页 |
| 2.方法 | 第30-32页 |
| ·Mah基因表达产物Mah-TrxA融合蛋白的可溶性及分布情况分析 | 第30页 |
| ·Mah基因表达条件优化 | 第30-31页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白的制备及复性 | 第31-32页 |
| 3.结果与分析 | 第32-34页 |
| ·Mah基因表达产物Mah-TrxA融合蛋白的可溶性及分布情况分析 | 第32-33页 |
| ·Mah基因表达条件优化 | 第33页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白的制备及复性 | 第33-34页 |
| 4 讨论 | 第34-36页 |
| ·包涵体纯化溶解 | 第34-35页 |
| ·蛋白复性 | 第35-36页 |
| 第四部分 Mah—TrxA融合蛋白的生物学特性分析 | 第36-44页 |
| 1.材料 | 第36页 |
| 2.方法 | 第36-39页 |
| ·制备嗜水气单胞菌主要外膜蛋白 | 第36-37页 |
| ·血清的制备 | 第37页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白生物学特性分析 | 第37-39页 |
| 3.结果与分析 | 第39-42页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白的抗原性分析 | 第39-40页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白免疫原性分析 | 第40-41页 |
| ·共同保护性抗原成分分析 | 第41页 |
| ·粘附素功能分析 | 第41页 |
| ·免疫保护试验 | 第41-42页 |
| 4.讨论 | 第42-44页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白抗原性分析 | 第42页 |
| ·Mah-TrxA融合蛋白免疫原性分析 | 第42页 |
| ·共同抗原成份分析 | 第42-43页 |
| ·粘附素功能分析 | 第43页 |
| ·免疫保护试验 | 第43-44页 |
| 结论 | 第44-45页 |
| 参考文献 | 第45-51页 |
| 附录 | 第51-55页 |
| 致谢 | 第55页 |
