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南极中度嗜盐菌盐单胞菌Nj223四氢嘧啶生物合成基因ectABC的克隆及其功能初步研究

摘要第1-12页
英文摘要第12-15页
1 前言第15-40页
   ·中度嗜盐菌概况第15页
   ·中度嗜盐菌的主要类群第15-16页
   ·中度嗜盐菌的生态分布第16-18页
   ·中度嗜盐菌的生理学特点第18-20页
     ·需盐性与耐盐性第18页
     ·对营养要求低第18-19页
     ·抗重金属毒害第19页
     ·细胞内可以累积无机盐离子第19-20页
     ·细胞膜中有离子泵第20页
     ·细胞内有相容性溶质及其转运系统第20页
   ·中度嗜盐菌的盐适应机制及渗透压调节第20-35页
     ·相容性溶质简介第20-22页
     ·相容性溶质的分类和生理功能第22-24页
     ·相容性溶质的合成与转运机制第24-29页
     ·相容性溶质作用机制第29-31页
     ·Na~+的排出第31-32页
     ·参与渗透压调节的蛋白第32-34页
     ·渗透压调节的基因工程研究进展第34-35页
   ·南极极端微生物研究进展第35-38页
     ·极端微生物简介第35-37页
     ·南极概况第37页
     ·南极普里兹湾生态环境研究进展第37-38页
   ·本论文研究的目的和意义第38-40页
2 材料与方法第40-63页
   ·材料第40-49页
     ·试验材料、菌株和质粒第40页
     ·酶第40页
     ·引物第40-41页
     ·其它试剂第41-42页
     ·主要仪器设备第42页
     ·培养基的配制第42-44页
     ·缓冲液及其它常用溶液的配制第44-48页
     ·主要的分析软件第48-49页
   ·方法第49-63页
     ·基本方法第49-53页
     ·菌株的筛选及鉴定第53-55页
     ·四氢嘧啶的分离纯化及其结构鉴定第55页
     ·ectABC 基因的克隆与测序第55-58页
     ·ectABC 基因的序列功能分析第58页
     ·ectA、ectB 和ectC 基因的重组表达及蛋白纯化第58-60页
     ·EctA、EctB 和EctC 的酶活测定第60-61页
     ·pH、金属离子和温度对EctA、EctB 及EctC 的影响第61页
     ·四氢嘧啶与其它相容性溶质对乳酸脱氢酶保护作用第61-62页
     ·四氢嘧啶对感受态细胞反复冻存后转化效率的影响第62-63页
3 结果与分析第63-86页
   ·ectABC 的功能分析第63-80页
     ·Nj223 菌株的分离鉴定第63-66页
     ·菌株Nj223 在高盐条件下主要累积的相容性溶质第66-67页
     ·ectABC 基因结构及功能分析第67-73页
     ·ectA、ectB 和ectC 的重组表达与纯化第73-77页
     ·EctA、EctB 和EctC 的酶学性质分析第77-80页
   ·四氢嘧啶的功能研究第80-86页
     ·四氢嘧啶对乳酸脱氢酶的保护效果第80-84页
     ·四氢嘧啶对感受态细胞反复冻存后转化效率的保护效果第84-86页
4 讨论第86-89页
5 小结与展望第89-90页
已发表和待发表的文章第90-91页
参考文献第91-105页
致谢第105页

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