嗜酸氧化亚铁硫杆菌启动子探针载体的构建及petⅡ启动子的分离鉴定
| 摘要 | 第1-5页 |
| ABSTRACT | 第5-7页 |
| 目录 | 第7-10页 |
| 第一章 绪论 | 第10-22页 |
| ·A.forrooxidans菌铁硫代谢系统介绍 | 第10-14页 |
| ·A.ferrooxidans菌硫氧化系统 | 第10-11页 |
| ·A.ferrooxidans菌亚铁氧化系统 | 第11-13页 |
| ·petII操纵子 | 第13-14页 |
| ·启动子研究方法概述 | 第14-20页 |
| ·启动子的结构和特点 | 第14-15页 |
| ·启动子的识别方法 | 第15-16页 |
| ·启动子克隆的方法 | 第16-19页 |
| ·启动子研究的方法 | 第19-20页 |
| ·课题的研究目的与研究内容 | 第20-22页 |
| ·依据和目的 | 第20-21页 |
| ·论文的主要研究内容 | 第21页 |
| ·论文课题受资助情况 | 第21-22页 |
| 第二章 启动子探针载体的构建 | 第22-30页 |
| ·实验材料 | 第22-23页 |
| ·菌种和质粒 | 第22页 |
| ·培养基 | 第22-23页 |
| ·质粒抽提试剂 | 第23页 |
| ·实验方法 | 第23-26页 |
| ·感受态细胞制备 | 第23页 |
| ·质粒提取 | 第23-24页 |
| ·定点突变PCR | 第24-25页 |
| ·PCR扩增产物的鉴定 | 第25页 |
| ·酶切PCR产物及载体 | 第25页 |
| ·载体和目的片段连接反应 | 第25页 |
| ·转化 | 第25-26页 |
| ·目的载体的筛选与鉴定 | 第26页 |
| ·结果与讨论 | 第26-28页 |
| ·质粒突变及测序分析 | 第26-27页 |
| ·启动子探针载体pSVB功能分析 | 第27-28页 |
| ·本章小结 | 第28-30页 |
| 第三章 PETII启动子的克隆与活性分析 | 第30-38页 |
| ·实验材料 | 第30-31页 |
| ·菌种与质粒 | 第30页 |
| ·培养基 | 第30页 |
| ·酶活性分析试剂 | 第30-31页 |
| ·实验方法 | 第31-35页 |
| ·A.ferrooxidans基因组DNA提取 | 第31-32页 |
| ·petII非编码区扩增 | 第32页 |
| ·PCR产物鉴定及双酶切 | 第32-33页 |
| ·探针载体和目的片段连接反应 | 第33-34页 |
| ·转化 | 第34页 |
| ·阳性克隆的筛选 | 第34页 |
| ·β-半乳糖苷酶活性测定 | 第34-35页 |
| ·结果与讨论 | 第35-37页 |
| ·petII非编码区测序 | 第35-36页 |
| ·β-半乳糖苷酶表达水平分析 | 第36-37页 |
| ·本章小结 | 第37-38页 |
| 第四章 PETII启动子核心区突变研究 | 第38-47页 |
| ·实验材料 | 第38-39页 |
| ·菌种与质粒 | 第38页 |
| ·培养基 | 第38页 |
| ·银染试剂 | 第38-39页 |
| ·实验方法 | 第39-44页 |
| ·A区定点突变体构建 | 第39-42页 |
| ·B区定点突变体构建 | 第42-44页 |
| ·结果与讨论 | 第44-46页 |
| ·petII启动子分析与核心区突变 | 第44-45页 |
| ·突变对启动子活性的影响 | 第45-46页 |
| ·本章小结 | 第46-47页 |
| 第五章 结论 | 第47-48页 |
| 参考文献 | 第48-55页 |
| 致谢 | 第55-56页 |
| 研究成果 | 第56页 |
