| 致谢 | 第1-8页 |
| 中文摘要 | 第8-9页 |
| 文献综述 | 第9-20页 |
| 1 牛隐孢子虫分类 | 第9-11页 |
| ·C.parvum | 第9-10页 |
| ·C.bovis | 第10-11页 |
| ·C.andersoni | 第11页 |
| 2 内生发育史 | 第11-12页 |
| 3 细胞免疫和体液免疫 | 第12-13页 |
| 4 流行病学特点 | 第13-14页 |
| 5 诊断 | 第14-19页 |
| ·粪便学诊断 | 第14-15页 |
| ·漂浮法 | 第14-15页 |
| ·染色法 | 第15页 |
| ·免疫学诊断 | 第15-17页 |
| ·酶联免疫吸附实验(ELISA) | 第15-16页 |
| ·免疫荧光法(IFA) | 第16页 |
| ·单克隆抗体(McAb)技术 | 第16页 |
| ·流式细胞技术(FC) | 第16-17页 |
| ·分子生物学诊断 | 第17-19页 |
| ·常规PCR | 第17页 |
| ·巢式PCR(Nested-PCR) | 第17-18页 |
| ·反转录PCR(RT-PCR) | 第18页 |
| ·免疫磁性捕获PCR法(IC-PCR) | 第18页 |
| ·ELISA-PCR | 第18页 |
| ·随机引物多态性DNA-PCR(RAPD-PCR) | 第18-19页 |
| ·聚合酶链式反应一限制性长度多态性(PCR-RFLP) | 第19页 |
| 6 防治 | 第19-20页 |
| 第一部分 某奶牛场隐孢子虫流行病学调查及动物感染试验 | 第20-27页 |
| 引言 | 第20页 |
| 1 材料与方法 | 第20-22页 |
| ·粪样采集 | 第20页 |
| ·隐孢子虫卵囊检查 | 第20-21页 |
| ·动物感染试验 | 第21-22页 |
| 2 结果 | 第22-25页 |
| ·卵囊形态结构 | 第22-23页 |
| ·奶牛隐孢子虫感染情况 | 第23页 |
| ·感染强度 | 第23-24页 |
| ·动物感染试验结果 | 第24-25页 |
| 3 分析与讨论 | 第25-27页 |
| ·奶牛隐孢子虫感染率 | 第25页 |
| ·隐孢子虫感染率与奶牛年龄的关系 | 第25页 |
| ·奶牛隐孢子虫种类与感染年龄关系 | 第25-26页 |
| ·C.andersoni可能存在着亚群 | 第26页 |
| ·C.andersoni具有潜在公共卫生意义 | 第26-27页 |
| 第二部分 PCR-RFLP鉴定奶牛隐孢子虫分离株种类 | 第27-35页 |
| 引言 | 第27页 |
| 1 材料与方法 | 第27-30页 |
| ·材料 | 第27页 |
| ·试验用卵囊 | 第27页 |
| ·试剂 | 第27页 |
| ·主要仪器和实验室耗材 | 第27页 |
| ·方法 | 第27-30页 |
| ·隐孢子虫卵囊的纯化 | 第28页 |
| ·DNA提取 | 第28-29页 |
| ·PCR扩增 | 第29页 |
| ·PCR产物的检测 | 第29页 |
| ·PCR-RFLP分析 | 第29-30页 |
| ·PCR产物测序 | 第30页 |
| ·种系发育分析 | 第30页 |
| 2 结果 | 第30-33页 |
| ·PCR扩增结果 | 第30-31页 |
| ·PCR-RFLP结果 | 第31-32页 |
| ·18SrDNA序列种系发育分析 | 第32-33页 |
| 3 分析与讨论 | 第33-35页 |
| 第三部分 抗牛源隐孢子虫单克隆抗体的研制 | 第35-50页 |
| 引言 | 第35页 |
| 1 材料与方法 | 第35-43页 |
| ·主要试剂 | 第35页 |
| ·试剂配制 | 第35-37页 |
| ·耗材及主要仪器 | 第37-38页 |
| ·细胞 | 第38页 |
| ·实验动物 | 第38页 |
| ·方法 | 第38-43页 |
| ·隐孢子虫卵囊提纯 | 第38页 |
| ·免疫用卵囊抗原的制备 | 第38-39页 |
| ·Balb/c鼠免疫程序 | 第39页 |
| ·筛选方法的建立 | 第39-40页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第40-42页 |
| ·单克隆抗体的鉴定 | 第42-43页 |
| 2 结果 | 第43-47页 |
| ·隐孢子虫颗粒性免疫原的制备 | 第43页 |
| ·检测抗隐孢子虫抗体间接ELISA方法的建立 | 第43-45页 |
| ·抗原抗体最佳稀释度的选择结果 | 第43页 |
| ·抗原最佳包被条件的测定结果 | 第43页 |
| ·酶标二抗最佳工作浓度的确定 | 第43页 |
| ·封闭剂、血清、酶标二抗最佳作用时间的测定结果 | 第43-44页 |
| ·免疫鼠血清效价检测结果 | 第44-45页 |
| ·杂交瘤细胞株的建立 | 第45-46页 |
| ·单抗的鉴定 | 第46-47页 |
| ·杂交瘤细胞培养上清效价的测定 | 第46页 |
| ·腹水中单抗效价的测定 | 第46页 |
| ·单抗的稳定性测定 | 第46页 |
| ·免疫荧光法对单抗的抗原定位 | 第46-47页 |
| 3 分析与讨论 | 第47-50页 |
| ·卵囊的纯化 | 第47页 |
| ·隐孢子虫的免疫原性 | 第47-48页 |
| ·影响细胞融合的原因 | 第48-49页 |
| ·免疫学诊断方法的建立 | 第49-50页 |
| 参考文献 | 第50-58页 |
| ABSTRACT | 第58-59页 |
