利用原核系统表达富含二硫键蛋白质的探索与改进
| 符号说明 | 第1-7页 |
| 中文摘要 | 第7-9页 |
| Abstract | 第9-11页 |
| 1 前言 | 第11-29页 |
| ·蛋白质表达系统简介 | 第11-17页 |
| ·原核生物表达系统 | 第11-12页 |
| ·真核生物表达系统 | 第12-17页 |
| ·曲霉植酸酶 | 第17-18页 |
| ·植酸酶 | 第17页 |
| ·植酸酶的种类与来源 | 第17-18页 |
| ·二硫键对蛋白质的作用 | 第18-21页 |
| ·二硫键对酶蛋白外泌的影响 | 第18页 |
| ·二硫键与酶分子构象的关系 | 第18-19页 |
| ·二硫键对酶蛋白折叠的影响 | 第19页 |
| ·二硫键对酶蛋白催化活性的影响 | 第19-20页 |
| ·曲霉植酸酶中的二硫键 | 第20-21页 |
| ·大肠杆菌表达系统研究进展 | 第21-28页 |
| ·大肠杆菌表达系统的特点 | 第21页 |
| ·大肠杆菌表达系统中表达载体的选择 | 第21-22页 |
| ·外源基因在大肠杆菌细胞中的表达部位 | 第22-24页 |
| ·影响外源基因表达的因素及提高表达效率和方法 | 第24-26页 |
| ·大肠杆菌 pET 载体简介 | 第26-28页 |
| ·本研究的目的意义 | 第28-29页 |
| 2 材料与方法 | 第29-54页 |
| ·实验材料 | 第29-31页 |
| ·菌株与质粒 | 第29-30页 |
| ·工具酶和生化试剂 | 第30页 |
| ·主要实验仪器 | 第30-31页 |
| ·引物 | 第31页 |
| ·主要试剂及培养基的配制 | 第31-35页 |
| ·实验相关溶液的配制 | 第31-35页 |
| ·培养基的配制 | 第35页 |
| ·实验方法 | 第35-54页 |
| ·植酸酶基因的改造 | 第35-38页 |
| ·周质定位质粒的改造 | 第38-42页 |
| ·原核表达菌株的构建 | 第42-48页 |
| ·植酸酶的诱导表达 | 第48-50页 |
| ·植酸酶催化活性的测定 | 第50-51页 |
| ·各菌株发酵的优化 | 第51-54页 |
| 3 结果与分析 | 第54-65页 |
| ·植酸酶基因的改造 | 第54-55页 |
| ·周质定位质粒的构建与改造 | 第55-57页 |
| ·原核表达菌株的构建与筛选 | 第57-58页 |
| ·植酸酶蛋白的诱导表达 | 第58-59页 |
| ·细胞周质定位促进植酸酶活性的提高 | 第59-60页 |
| ·具有氧化型细胞质的工程菌明显提高植酸酶的活性 | 第60-61页 |
| ·各菌株发酵的优化 | 第61-65页 |
| 4 讨论 | 第65-69页 |
| ·培养条件的改变可以部分提高植酸酶活性 | 第65页 |
| ·细胞周质定位能够有效提高植酸酶催化活性 | 第65-66页 |
| ·氧化型细胞质有效促进植酸酶的表达 | 第66-67页 |
| ·菌株发酵条件优化 | 第67-69页 |
| 5 结论 | 第69-70页 |
| 参考文献 | 第70-77页 |
| 致谢 | 第77-78页 |
| 攻读硕士学位期间发表的论文 | 第78页 |
